小鼠三叉神經(jīng)元細(xì)胞

細(xì)胞基本屬性：

細(xì)胞簡(jiǎn)介：小鼠三叉神經(jīng)元細(xì)胞分離自腦組織；三叉神經(jīng)為十二對(duì)腦神經(jīng)之中的第五對(duì)腦神經(jīng)，是混合性腦神經(jīng)之一。三叉神經(jīng)由兩種纖維成分所組成。一種是一般軀體感覺纖維，其神經(jīng)元胞體位于顱中窩顳骨巖部三叉神經(jīng)壓跡處、由假單極神經(jīng)元組成的三叉神經(jīng)節(jié)內(nèi)。三叉神經(jīng)節(jié)的中樞突組成三叉神經(jīng)感覺根，在腦干腦橋臂和腦橋基底部交界處入腦，傳到頭面部觸覺的神經(jīng)纖維終止于三叉神經(jīng)腦橋核，傳到溫覺、痛覺的神經(jīng)纖維終止于三叉神經(jīng)脊束核。另一種纖維是特殊內(nèi)臟運(yùn)動(dòng)纖維，起源于特殊內(nèi)臟運(yùn)動(dòng)核之中的三叉神經(jīng)運(yùn)動(dòng)核，三叉神經(jīng)運(yùn)動(dòng)核發(fā)出來的特殊內(nèi)臟運(yùn)動(dòng)纖維成分組成三叉神經(jīng)運(yùn)動(dòng)根，從腦橋臂和基底部交界處出腦，纖維成分加入到三叉神經(jīng)第三大分支下頜神經(jīng)內(nèi)支配咀嚼肌等肌肉的運(yùn)動(dòng)。

培養(yǎng)基：MSCM基礎(chǔ)培養(yǎng)基：，F(xiàn)BS，Penicillin，Streptomycin等；

包被條件：PLL(0.1mg/ml)

換液頻率：每2-3天換液一次

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

原代細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1.準(zhǔn)備：取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺(tái)面，紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

2.布局：點(diǎn)燃酒精燈，安裝吸管帽。

3.處理組織：把組織塊置于燒杯中，用Hanks液漂洗2~3次，去除血污；如懷疑組織可能污染，可先置于含有青的混合液中30~60分鐘。

4.剪切：用眼科剪把組織切成2~3毫米大小的塊，以便于消化。加入比組織塊總量多30~50倍的液，然后一并倒入三角燒瓶中，結(jié)扎瓶口或塞以膠塞。

5.消化：或用恒溫水浴，或置于37℃溫箱消化均可，消化中每隔20分鐘應(yīng)搖動(dòng)一次，如用電磁恒溫?cái)嚢杵飨谩Ｏ瘯r(shí)間依組織塊的大小和組織的硬度而定。

6.分離：在消化過程中見消化液發(fā)混濁時(shí)，可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察，如組織已分散成細(xì)胞團(tuán)或單個(gè)細(xì)胞，立即終止消化，隨即通過適宜不銹鋼篩，濾掉尚未充分消化開的組織塊。低速（500~1000轉(zhuǎn)/分）離心消化液5分鐘，吸出上清，加入適量含有血清的培養(yǎng)液。

7.計(jì)數(shù)：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，如細(xì)胞懸液細(xì)胞密度過大，再補(bǔ)加培養(yǎng)液調(diào)整后，分裝入培養(yǎng)瓶中。對(duì)大多數(shù)細(xì)胞來說，pH要求在7.2~7.4范圍，培養(yǎng)液呈微紅色，如顏色偏黃，說明液體變酸，可用NaHCO3調(diào)整。

8.培養(yǎng)：置于36.5℃溫箱培養(yǎng)，如用CO2溫箱培養(yǎng)，瓶蓋需擰松半圈。

注意事項(xiàng)：

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。

2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，請(qǐng)注意保持無菌操作。

3. 傳代培養(yǎng)過程中，消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài)。

4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通；由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。

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