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Annexin V-PE/7-AAD細胞凋亡檢測試劑盒

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公司名稱上海邦景實業有限公司
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所在地上海市
廠商性質其他
更新時間2022/5/12 14:03:04
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Annexin V-PE 細胞凋亡檢測試劑盒

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上海邦景實業有限公司（Shanghai Bangjing Industrial Co., Ltd.，China）先后與天津中醫學院、復旦大學、上海交通大學醫學院、上海交通大學、華東師范大學、第二軍醫大學、南京大學，暨南大學，南京工業大學，曙光醫院、華山醫院、瑞金醫院、上海有機研究所、中科院上海分院等多家單位建立了良好的合作關系。本公司可為您提供科研ELISA試劑盒，種屬標本齊全,有專門針對人血清、血漿、全血、分泌物、尿液、細胞培養上清液、組織勻漿、組織液等標本的試劑盒；另有針對各種動物（鼠、兔、牛、馬、雞、豬、狗、山羊、猴、魚）的科研試劑。

公司秉承“專注品質、信守承諾、積極溝通、創新服務”的企業文化積極參與生物領域的技術創新和技術服務，力求為我國科研事業更好的，更專業的服務！

公司售后服務宗旨:有質量問題可申請退換，有技術疑問可隨時給于解答，一對一的客服服務，客戶的需求也是我們不斷的更新服務。

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貨號	BJ-01X6496

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Annexin V-PE/7-AAD細胞凋亡檢測試劑盒產品信息

操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

中文名稱：Annexin V-PE/7-AAD細胞凋亡檢測試劑盒

英文名稱：

產品規格：50T|100T

產品貨號：BJ-01X6496

產品背景：

細胞凋亡是細胞的基本特征之一，它在機體的胚胎發育、組織修復、內環境的穩定和一些疾病發生過程等方面起著十分重要的作用。

在正常細胞中，磷脂酰絲(PS)只分布在細胞膜脂質雙層的內側，而在細胞凋亡早期，細胞膜中的磷脂酰絲(PS)由脂膜內側翻向外側。在體內，巨噬細胞可以識別翻轉到細胞膜表面的PS 從而將這些程序性死亡的細胞清除，因此凋亡過程中并不伴隨局部的炎癥反應，而在細胞壞死的過程中則常常伴隨著炎癥反應。

AnnexinⅤ是一種分子量為35-36kD的Ca2+依賴性磷脂結合蛋白，能與細胞凋亡過程中翻轉到膜外的PS 高親和力特異性結合。PS 外翻發生在細胞核破裂，DNA 片段化以及凋亡相關蛋白出現之前，這使得Annexin V 與PS的結合成為凋亡早期的一種重要檢測標志事件。

檢測原理：

在正常的活細胞中，磷脂酰絲(phosphotidylserine，PS)位于細胞膜的內側，但在早期凋亡的細胞中，PS 從細胞膜的內側翻轉到細胞膜的表面，暴露在細胞外環境中。

Annexin-Ⅴ能與PS 高親和力結合。可通過細胞外側暴露的磷脂酰絲與凋亡早期細胞的胞膜結合。用標記了PE的AnnexinⅤ作為熒光探針，利用流式細胞儀或熒光顯微鏡可檢測細胞凋亡的發生。細胞壞死的過程中也會發生細胞膜損傷，壞死的細胞會結合Annexin V-PE。

Annexin V-PE 通常與細胞膜非滲透性核酸熒光染料聯合使用以檢測凋亡細胞。常用的染料是7-AAD。正常細胞和早期凋亡細胞的細胞膜是完整的，核酸染料7-AAD 不能透過完整的細胞膜，但在凋亡中晚期的細胞和壞死細胞，7-AAD 能夠透過細胞膜與細胞核結合呈現紅色。

7-AAD/Annexin V-PE試劑盒將AnnexinⅤ與7-AAD匹配使用，可以將凋亡早期的細胞和晚期的細胞以及死細胞區分開來。壞死細胞可以同時與Annexin V-PE和7-AAD 結合顯色，而7-AAD 則被排除在活細胞(PE陰性)和早期凋亡細胞(PE陽性)之外。在沒有巨噬細胞的情況下，凋亡的后階段會像細胞壞死一樣發生整個細胞的解體，從而使凋亡晚期的細胞也同時被PE和7-AAD 結合染色呈現雙陽性。

儲存條件：染色液2-8℃避光保存；結合液2-8℃保存；長期不用-20℃保存。

Annexin V-PE染色液避免反復凍融，凍融2次以上可能會失效。長期保存分裝后-20℃保存。

有效期：一年。

細胞培養操作規程：

一．培養基及培養凍存條件準備：

1）準備F-12K培養基；優質胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2）培養條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。