人腦靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞提取物【Human Brain: Normal Cerebral Venous Vascular Endothelial Cells Derivatives】

人腦靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞提取物是從人原代腦靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞提取的，人原代腦靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞從正常人腦靜脈血管內(nèi)皮組織制備。正常人腦靜脈血管內(nèi)皮組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來(lái)合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過(guò)了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過(guò)Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

 實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

鼠傷寒沙門(mén)菌單重?zé)晒?/span>PCR檢測(cè)試劑盒48Ethyl 5-amino-cyano-(2-ethoxy-oxoethyl)thiophene-carboxylate5816

豬霍亂沙門(mén)菌單重?zé)晒?/span>PCR檢測(cè)試劑盒485-Fluorouracil511

腸炎沙門(mén)菌單重?zé)晒?/span>PCR檢測(cè)試劑盒48cis-Octahydro-isoindole2182

志賀菌單重?zé)晒?/span>PCR檢測(cè)試劑盒482-Benzylsuccinic acid39726

小腸結(jié)腸炎耶爾森菌單重?zé)晒?/span>PCR檢測(cè)試劑盒483-(tert-Butoxycarbonyl),2-dimethyl-phenyloxazolidine-carboxylic acid14352
N6-Benzyladenine  中文名：N6-芐基腺嘌呤  分子式：C12H11N5    植物維生素B12elisa試劑盒   植物維生素B12試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   植物維生素B12試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：植物維生素B12試劑盒、植物維生素B12eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

N6-Benzoyladenine  中文名：N6-苯甲酰基腺嘌呤  分子式：C12H9N5O    植物激素脫落酸elisa試劑盒   植物激素脫落酸試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   植物激素脫落酸試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：植物激素脫落酸試劑盒、植物激素脫落酸eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  

N6-Benzoyl-5'-O-(4,4'-dimethoxytrityl)-2'-deoxyadenosine  中文名：N6-苯甲酰基-5'-O-(4,4'-二甲氧基三苯基)-2'-脫氧腺苷  分子式：C38H35N5O6    豬Ⅲ型前膠原基端肽(PⅢ)ELISAKit  

N4-Benzoylcytosine  中文名：N4-苯甲酰基胞嘧啶  分子式：C11H9N3O2    豬低分子肝素(LMWH)ELISAKit  

N4-Benzoylcytidine  中文名：N4-苯甲酰胞苷  分子式：C16H17N3O6    豬單核細(xì)胞增多性李斯特菌素O((LLO)ELISAKit
乙二醇雙[4-(乙氧羰基)苯基]醚(>98.0%(GC))  Ethylene Glycol Bis[4-(ethoxycarbonyl)phenyl] Ether  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC) 英文名稱HumanangiotensinogenELISAKit人血管緊張素原(aGT)規(guī)格：96T/48T

乙二醇雙(4-羧苯基)醚(>95.0%(T))  Ethylene Glycol Bis(4-carboxyphenyl) Ether  質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(T) 英文名稱HumanangiotensionⅠELISAKit人血管緊張素I(AngI)規(guī)格：96T/48T

9,9-雙[4-(2-羥乙氧基)苯基]芴(>98.0%(GC))  9,9-Bis[4-(2-hydroxyethoxy)phenyl]fluorene  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC) 英文名稱HumanangiotensionIIELISAKit人血管緊張素II(ANGII)規(guī)格：96T/48T

pre-ELM-11(>98.0%(T))  pre-ELM-11  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T) 英文名稱HumanansferrieceptorELISAKit人轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

苯均四酸(>98.0%(T))  Pyromellitic Acid  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T) 英文名稱HumanansformingGrowthfactorαELISAKIT人轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α(TGFα)規(guī)格：96T/48T

1,4-雙[(1H-咪唑-1-基)甲基]苯(>98.0%(GC))  1,4-Bis[(1H-imidazol-1-yl)methyl]benzene  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC) 英文名稱HumanansformingGrowthfactorβ1ELISAkit人轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGFβ1)規(guī)格：96T/48T

2,2'-二氨基-4,4'-雙噻唑(>98.0%(HPLC)(T))  2,2'-Diamino-4,4'-bithiazole  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC)(T) 英文名稱HumanAOPPELISAKit人晚期氧化蛋白(AOPP)規(guī)格：96T/48T

1H-咪唑-4,5-二羧酸(>97.0%(HPLC)(T))  1H-Imidazole-4,5-dicarboxylic Acid  質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(HPLC)(T) 英文名稱Humanapelin-12ELISAKit人apelin-12(apelin-12)規(guī)格：96T/48T

2,6-萘二羧酸(>98.0%(GC)(T))  2,6-Naphthalenedicarboxylic Acid  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)(T) 英文名稱HumanApelin-12ELISAKIT人Apelin-12規(guī)格：96T/48T

1,4-萘二羧酸(>95.0%(T))  1,4-Naphthalenedicarboxylic Acid  質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(T) 英文名稱HumanApelin-12ELISAKit人Apelin-12規(guī)格：96T/48T
人腦靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞提取物價(jià)格Trenbolone acetate  10161-34-9  中文名：  分子式：C20H24O3    人結(jié)腸癌抗原(CCA)ELISAKit  

Trenbolone  10161-33-8  中文名：群勃龍  分子式：C18H22O2    中文名稱   方法   規(guī)格

Mestanolone  521-11-9  中文名：美雄諾龍  分子式：C20H32O2    人H-rasELISAKit              

Nandrolone undecylate  862-89-5  中文名：十一酸諾龍  分子式：C29H46O3    人轉(zhuǎn)鐵蛋白受體2(TFR2)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒   Human TFR2 (ansferrin Receptor 2) ELISA Kit

Oxandrolone  53-39-4  中文名：氧甲氫龍  分子式：C19H30O3    人游離睪(F-TESTO)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒   Human F-TESTO (Free Testosterone) ELISA Kit

 運(yùn)輸和保存：
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無(wú)法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，如鋪瓶率超過(guò)85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。