肝脂酶（HL）檢測試劑盒測定意義：
肝酯酶是脂肪分解酶，在肝實質(zhì)細(xì)胞中合成，存在于肝臟竇周間隙內(nèi)皮細(xì)胞表面和竇周間隙腔面的肝細(xì)胞微絨毛表面，可促進(jìn)脂蛋白中的膽固醇向類固醇激素轉(zhuǎn)化，血漿中的 HL 活性增高時，血漿中小顆粒可導(dǎo)致LDL 水平升高，加速動脈粥樣硬化的發(fā)生。
測定原理：
肝酯酶水解 α -乙酸萘酯產(chǎn)生 α -萘酚，可與固藍(lán) B 鹽形成紫紅色偶氮化合物，在 595nm 有特征吸收峰，顏色深淺在一定范圍內(nèi)與肝酯酶活性成正相關(guān)。
自備實驗用品及儀器：
天平、冷凍離心機(jī)、研缽、水浴鍋、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板。
試劑組成和配制:
試劑一：液體 110mL×1 瓶，4℃保存。試劑二：液體 1mL×1 瓶，4℃避光保存。試劑三：液體8mL×1 瓶，4℃保存。
試劑四：液體 1mL×1 瓶，4℃避光保存。
肝脂酶（HL）檢測試劑盒樣品處理:
1. 組織：按照質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g，加入 1mL 試劑一）加入試劑一，冰浴勻漿后于 4℃，10000g 離心 10min，取上清待測。
2. 細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104 個）：試劑一體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)胞加入 1mL 試劑一）加入試劑一，冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒， 總時間 3min）；然后于 4℃，10000g 離心 10min，取上清待測。
3. 血清：直接測定。
測定操作:
| 對照管 | 測定管 |
樣品（μ L） | 20 | 20 |
試劑一（μ L） | 90 | 80 |
試劑二（μ L） |
| 10 |
混勻，30℃水浴 10min | ||
試劑三（μ L） | 80 | 80 |
試劑四（μ L） | 10 | 10 |
充分混勻，30℃靜置 5min，于微量石英比色皿/96 孔板，測定 595nm 處吸光值，記為A 對照管和 A 測定管，△A=A 測定管- A 對照管 | ||
計算公式:
肝脂酶（HL）檢測試劑盒a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下 標(biāo)準(zhǔn)曲線：y= 0.1519 x -0.1241，R2=0.9994
1. 按照蛋白濃度計算
酶活性定義：每毫克蛋白每分鐘水解α -乙酸萘酯產(chǎn)生 1μ mol α -萘酚為一個酶活力單位。HL 活性（μ mol /min/mg prot）= （△A+0.1241）÷0.1519×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷T
= 6.58×（△A+0.1241）÷Cpr
2. 按照樣本質(zhì)量計算
酶活性定義：每克組織每分鐘水解α -乙酸萘酯產(chǎn)生 1μ mol α -萘酚為一個酶活力單位。
HL 活性（μ mol /min/g 鮮重）= （△A+0.1241）÷0.1519×V 反總÷（W×V 樣÷V 樣總）÷T
= 6.58×（△A+0.1241）÷W
3. 按照細(xì)胞數(shù)量計算
酶活性定義：每 104 個細(xì)胞每分鐘水解α -乙酸萘酯產(chǎn)生 1μ mol α -萘酚為一個酶活力單位。HL 活性（μ mol /min/104 cell）= （△A+0.1241）÷0.1519×V 反總÷（V 樣×細(xì)胞數(shù)量÷V
樣總）÷T
= 6.58×（△A+0.1241）÷細(xì)胞數(shù)量
4. 按照液體體積計算
酶活性定義：每毫升血清每分鐘水解α -乙酸萘酯產(chǎn)生 1μ mol α -萘酚為一個酶活力單位。HL 活性（μ mol /min/mL）=（△A+0.1241）÷0.1519×V 反總÷V 樣÷T
= 6.58×（△A+0.1241）
V 反總：反應(yīng)總體積，0.2mL；V 樣：反應(yīng)體系中加入樣本體積，0.02mL；W：樣本質(zhì)量，g；V 樣總：加入提取液體積，1mL；T：反應(yīng)時間，10min
b. 用 96 孔板測定的計算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y= 0.076 x -0.1241，R2=0.9994
1. 按照蛋白濃度計算
酶活性定義：每毫克蛋白每分鐘水解α -乙酸萘酯產(chǎn)生 1μ mol α -萘酚為一個酶活力單位。HL 活性（μ mol /min/mg prot）= （△A+0.1241）÷0.076×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷T
= 13.16×（△A+0.1241）÷Cpr
2. 按照樣本質(zhì)量計算
酶活性定義：每克組織每分鐘水解α -乙酸萘酯產(chǎn)生 1μ mol α -萘酚為一個酶活力單位。HL 活性（μ mol /min/g 鮮重）= （△A+0.1241）÷0.076×V 反總÷（W×V 樣÷V 樣總）÷T
= 13.16×（△A+0.1241）÷W
3. 按照細(xì)胞數(shù)量計算
酶活性定義：每 104 個細(xì)胞每分鐘水解α -乙酸萘酯產(chǎn)生 1μ mol α -萘酚為一個酶活力單位。HL 活性（μ mol /min/104 cell）= （△A+0.1241）÷0.076×V 反總÷（V 樣×細(xì)胞數(shù)量÷V
樣總）÷T
= 13.16×（△A+0.1241）÷細(xì)胞數(shù)量
4. 按照液體體積計算
酶活性定義：每毫升血清每分鐘水解α -乙酸萘酯產(chǎn)生 1μ mol α -萘酚為一個酶活力單位。HL 活性（μ mol /min/mL）=（△A+0.1241）÷0.076×V 反總÷V 樣÷T
= 13.16×（△A+0.1241）
肝脂酶（HL）檢測試劑盒V 反總：反應(yīng)總體積，0.2mL；V 樣：反應(yīng)體系中加入樣本體積，0.02mL；W：樣本質(zhì)量，g；V 樣總：加入提取液體積，1mL；T：反應(yīng)時間，10min
