土壤蔗糖酶(S-SC)試劑盒-微量法注意:正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定。
規格:100T/48S
產品說明:
S-SC 能夠水解蔗糖變成相應的單糖而被機體吸收,其酶促作用產物與土壤中有機質、氮、磷含量,微生物數量及土壤呼吸強度密切關,是評價土壤肥力的重要指標。
S-SC 催化蔗糖降解產生還原糖,進一步與 3,5-二硝基水楊酸反應,生成棕紅色氨基化合物, 在 540nm 有特征光吸收,在一定范圍內 540nm 光吸收增加速率與 S-SC 活性成正比。
自備用品:
可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量比色皿/96 孔板、冰、甲苯(不允許快遞)和蒸餾水。
土壤蔗糖酶(S-SC)試劑盒-微量法產品內容:
試劑一:甲苯 1mL×1 瓶,4℃保存;(自備)試劑二:液體 7.5mL×1 瓶,4℃保存;
試劑三:粉劑×1 瓶,4℃保存;臨用前每瓶加入 22mL 雙蒸水充分溶解備用; 試劑四:液體 30mL×1 瓶,4℃保存;
標準品:粉劑×1 支,4℃保存,含 10mg 無shui葡萄糖(干燥失重<0.2%),臨用前加入 1mL 蒸餾水溶解備用,4℃可保存 1 周,或者用飽和苯甲酸溶液溶解,可保存更長時間。
標準品準備:將標準品用蒸餾水稀釋至 0.5、0.4、0.3、0.2、0.1mg/mL。
土壤蔗糖酶(S-SC)試劑盒-微量法操作步驟:
a.分光光度計預熱 30min 以上,調節波長至 540nm,蒸餾水調零。
b.測定步驟和加樣表:
試劑名稱 | 測定管 | 對照管 | 標準管 | 空白管 |
風干土樣(g) | 0.03 | 0.03 | - | - |
試劑一(μL) | 5 | 5 | - | - |
振蕩混勻,使土樣全部濕潤,37℃水浴 15min | ||||
試劑二(μL) | 75 | 75 | - | - |
試劑三(μL) | 220 | - | - | |
雙蒸水(μL) | 220 | - | - | |
混勻,放入 37℃水浴培養 24 小時,10000g,4℃,離心 5min,取上清液,將培養結束的上清液稀釋 10 倍(取 0.1mL 上清液,加入 0.9mL 蒸餾水)若后續測定吸光值仍大于 1.5 繼續稀釋。 | ||||
上清液(μL) | 85 | 85 | ||
標準品(μL) | 85 | |||
蒸餾水(μL) | 85 | |||
試劑四(μL) | 215 | 215 | 215 | 215 |
充分混勻,放入沸水浴中煮沸 5min(蓋緊,以防止水分散失),流水冷卻后充分混勻。
標準曲線的建立:540nm 處蒸餾水調零,讀標準管吸光值,計算 A=A 標準管-A 空白管。以濃度(y) 為縱坐標,吸光度 A(x)為橫坐標建立標準曲線。
樣品處理:540nm 處蒸餾水調零,取 200ul 至微量比色皿或 96 孔板中讀吸光值 A。計算ΔA=A 測定管-A 對照管。每個測定管需設一個對照管。
土壤蔗糖酶(S-SC)試劑盒-微量法S-SC 活性計算:
根據標準曲線,將ΔA 帶入公式中(x)計算樣品濃度 y(mg/mL)。
單位的定義:37℃,每天每 g 土樣中產生 1mg 還原糖定義為一個 S-SC 活力單位。
S-SC 活力(U /g 土樣)= y×10×V 反總÷W÷T =100×y
10:稀釋倍數;T:反應時間,1d; V 反總:反應體系總體積:0.3mL;W:樣品質量,0.03g。