土壤幾丁質酶試劑盒-微量法注意：正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義
幾丁質主要存在于蝦、蟹、昆蟲等甲殼類動物的外殼與軟體動物的器官(例如烏賊的軟骨)， 以及真菌類的細胞壁中，而幾丁質酶(EC 3.2.1.14)可催化幾丁質水解，具有抵御真菌侵染的作用，成為抗真菌病害的研究熱點。
測定原理
幾丁質酶水解幾丁質產生 N-乙酰氨基葡萄糖，進一步與對二甲氨基苯/甲醛產生紅色化合物，在 544nm 處有特征吸收峰，吸光值增加速率反映了幾丁質酶的活性。
自備實驗用品及儀器
天平、水浴鍋、離心機、震蕩儀、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板，甲苯、
蒸餾水。
土壤幾丁質酶試劑盒-微量法試劑組成和配制
試劑一：液體 10mL×1 瓶，4℃保存。
試劑二：液體 4mL×1 瓶，4℃保存。
試劑三：液體 65mL×1 瓶，4℃避光保存。
樣品處理
新鮮土樣風干，過 30-50 目篩。
土壤幾丁質酶試劑盒-微量法測定操作表
對照管 | 測定管 | |
土樣（g） | 0.1 | 0.1 |
甲苯（μL） | 15 | 15 |
混勻，25℃靜置 15min | ||
蒸餾水（μL） | 100 | |
試劑一（μL） | 100 | |
混勻，37℃培養 24h | ||
蒸餾水（μL） | 200 | 200 |
4000rpm，4℃，離心 30min，取上清 200μL 于新的 EP 管中 | ||
試劑二（μL） | 20 | 20 |
混勻，沸水浴 5min | ||
試劑三（μL） | 600 | 600 |
混勻，37℃顯色 20min，取 200μL 于微量石英比色皿/96 孔板中，蒸餾水調零，測定 544nm 處吸光值，記為 A 對照管和 A 測定管，ΔA=A 測定管-A 對照管。 | ||
計算公式
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準曲線：y=5.2714x-0.0007，R2=0.9989；x 為標準品濃度（mg/mL），y 為吸光值 ΔA。 酶活性定義：37℃條件下，每克土壤每天分解幾丁質產生 1μg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個酶活性單位。
土壤幾丁質酶活性（μg/d/g 土樣）=（ΔA +0.0007）÷5.2714×V 反總÷W÷T×1000
= 598×（ΔA +0.0007）
V 反總：反應體系總體積，0.315mL；W：樣本質量，0.1g；T：反應時間，1d；1000：
1mg/mL=1000μg/mL
b.用 96 孔板測定的計算公式如下
標準曲線：y=2.6357x-0.0007，R2=0.9989；x 為標準品濃度（μg/mL），y 為吸光值 ΔA。
酶活性定義：37℃條件下，每克土壤每天分解幾丁質產生 1μg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個酶活性單位。
土壤幾丁質酶活性（μg/d/g 土樣）=（ΔA +0.0007）÷2.6357×V 反總÷W÷T×1000
= 1195×（ΔA +0.0007）
V 反總：反應體系總體積，0.315mL；W：樣本質量，0.1g；T：反應時間，1d；1000：
1mg/mL=1000μg/mL
土壤幾丁質酶試劑盒-微量法注意事項
1． 試劑一充分混勻后再使用。
