細(xì)胞傳代步驟：
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
大鼠牙齦上皮分離自牙齦組織；牙齦是附著在牙頸和牙槽突部分的粘膜組織，呈粉紅色、有光澤、質(zhì)堅(jiān)韌。牙齦邊緣稱為齦緣，正常呈月芽形。齦緣與牙頸之間的小溝稱齦溝。兩鄰牙之間的牙齦突起稱齦乳突。也叫齒齦，通稱牙床；是指包住齒頸的黏膜組織，粉紅色，內(nèi)有很多血管和神經(jīng)。牙齦上皮長(zhǎng)期被認(rèn)為是抵御口腔中持續(xù)存在的細(xì)菌的被動(dòng)免疫屏障，隨著對(duì)牙周致病菌的不斷認(rèn)識(shí)，發(fā)現(xiàn)牙齦上皮不僅僅是抵御微生物的物理屏障，上皮細(xì)胞還可以分泌抗菌多肽，參與先天性免疫。牙齦上皮作為牙周組織的道屏障，在抵御牙周炎細(xì)菌入侵的過程中發(fā)揮了重要作用，建立正常牙齦上皮細(xì)胞體外培養(yǎng)體系，將為各種牙齦上皮相關(guān)的研究提供穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀?/span>
方法簡(jiǎn)介：
公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠牙齦上皮采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)：
公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠牙齦上皮經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | |
組織來(lái)源 | 牙齦組織 | 產(chǎn)品貨號(hào) | YS-01X7582 |
生長(zhǎng)特性 | 貼壁 | 細(xì)胞形態(tài) | 上皮細(xì)胞樣 |
培養(yǎng)信息：
包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）
培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
傳代特性 可傳1-2代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細(xì)胞復(fù)蘇步驟:
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
公司正在出售的產(chǎn)品：
大鼠白介素1(IL-1)試劑盒 ，英文名： IL-1 ELISA Kit
Rabbit collagenase II (Collagenase II) ELISA Kit 兔子膠原酶II(Collagenase II)試劑盒
ELISA 小鼠巨嗜細(xì)胞趨化蛋白-1(mouse MCP-1) 進(jìn)口分裝
CLIAKitforIL-23(HumanIerleukin23)ELISAKit人白介素23
通用型抗酸性0酸酶(SACP)活性比色法定量試劑盒20次
ELISAKitGP-ⅡbⅢa大鼠血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa
乙醇脫氫酶（ADH）測(cè)定試劑盒（紫外比色法）
微量游離血紅蛋白（FHb）測(cè)定試劑盒（比色法）
超微量Na+K+–ATP酶測(cè)定試劑盒
測(cè)定試劑盒（紫外比色法）
KIAA1310蛋白抗體
鴨子白介素12(IL-12)試劑盒
Human aithrombin III (AT- III) aibody ELISA Kit 人抗Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)試劑盒
Humanlymphocytefunctionassociatedaigen3,LFA-3ELISAKit 人淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原3(LFA-3/CD58)試劑盒 進(jìn)口分裝
CLIAKitforACV-A(HumanActivinA)ELISAKit人活化素A
血液組織蛋白酶B(CATHEPSINB)活性熒光定量試劑盒20次
mouseprolactin,PRLELISAKit小鼠催乳素(PRL)試劑盒
雙特異性磷酸酶5重組兔單克隆抗體
HA重組甲型流感 H7N3 (A/turkey/Italy/214845/2002) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein
PAX9(Paired box gene 9 0.5mgPAX9(Paired box gene 9) 配對(duì)盒基因9抗原
CSF2RB重組人 CD131 / CSF2RB / IL3RB / IL5RB 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein
CALCB Protein Human 重組人 CALCB / CGPR / Calcitonin 2 蛋白
BMPR2 Protein Human 重組人 BMPR2 / BMPR-II 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽)
大鼠牙齦上皮細(xì)胞PAX9(Paired box gene 9 0.5mgPAX9(Paired box gene 9) 配對(duì)盒基因9抗原
CALCB Protein Human 重組人 CALCB / CGPR / Calcitonin 2 蛋白
HA重組甲型流感 H7N3 (A/turkey/Italy/214845/2002) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein
BMPR2 Protein Human 重組人 BMPR2 / BMPR-II 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽)
CSF2RB重組人 CD131 / CSF2RB / IL3RB / IL5RB 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein
細(xì)胞凍存步驟:
待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例；
1．細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。
3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
