細胞傳代步驟：
如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
細胞簡介：
人食管癌組織源成纖維分離自食管癌組織；食管癌是常見的消化道腫瘤，每年約有30萬人死于食管癌。其發病率和死亡率各國差異很大。我國是世界上食管癌高發地區之一，每年平均病死約15萬人。男多于女，發病年齡多在40歲以上。食管癌典型的癥狀為進行性咽下困難，先是難咽干的食物，繼而是半流質食物，后水和唾液也不能咽下。成纖維細胞（Fibroblast）是疏松結締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質細胞分化而來。成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構，其細胞核呈規則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質嗜弱堿性，具明顯的蛋白質合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現跟纖維細胞的互相轉化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的表皮成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現為小的突起；6h后細胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。
方法簡介：
公司實驗室分離的人食管癌組織源成纖維采用-膠原酶混合酶消化后差速貼壁制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測：
公司實驗室分離的人食管癌組織源成纖維經Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產品名稱 | 產品規格 | 5×105cells/T25細胞培養瓶 | |
組織來源 | 食管癌組織 | 產品貨號 | YS-01X7484 |
生長特性 | 貼壁 | 細胞形態 | 成纖維細胞樣 |
培養信息：
培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態 成纖維細胞樣
傳代特性 可傳5代左右；3代以內狀態佳
消化液 0.25%
培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細胞復蘇步驟:
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
公司正在出售的產品：
大鼠白血病抑制因子(LIF)試劑盒 ，英文名： LIF ELISA Kit
Opioid receptor in mouse beta (beta -EPR) ELISA Kit 小鼠β內啡肽受體(β-EPR)試劑盒
ELISA 小鼠(mouse Fibrinogen) 進口分裝
CLIAKitforIrna(HumanImmuneRNA)ELISAKit人免疫核糖核酸
通用型動物細胞周期(G1/S和G2/M期)同步(SYNCHRONY)處理試劑盒10次
ELISAKitTNF-β大鼠腫瘤壞死因子β
小鼠3(VD3)試劑盒 96T/48T
小鼠2(VD2)試劑盒 96T/48T
小鼠(VD)試劑盒 96T/48T
小鼠C(VC)試劑盒 96T/48T
β1-6 N-乙酰氨基葡萄糖轉移酶3抗體
小鼠晚期氧化蛋白產物(AOPP)試劑盒 96T/48T
Rat caspase 9 (Casp-9) ELISA Kit 大鼠胱天蛋白酶9(Casp-9)試劑盒
HumanProteinSELISAKit 人蛋白S(ProteinS)試劑盒 96T/48T 進口分裝
ChickenN-acetyl-β-D-glucosaminidase,NAG試劑盒雞N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)試劑盒規格：96T/48T
載玻片細胞P21蛋白表達熒光顯微鏡試劑盒10/20次
Mousefreefattyacids,FFAELISAKit小鼠游離脂肪酸(FFA)試劑盒規格：96T/48T
跨膜蛋白111抗體
C2重組人 C2 / Complement Component 2 蛋白 (Fc 標簽) Protein
抗增生抗體靶分子1(TAPA1)重組蛋白 Recombinant Target Of The Antiproliferative Antibody 1 (TAPA1)
NTF3重組人 NTF3 / Neurotrophin 3 蛋白 Protein
CEACAM5 Protein Human 重組人 CEACAM5 / CD66e 蛋白
HA Protein H3N2 重組甲型流感 H3N2 (A/Hong Kong/1/1968) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白
人食管癌組織源成纖維細胞抗增生抗體靶分子1(TAPA1)重組蛋白 Recombinant Target Of The Antiproliferative Antibody 1 (TAPA1)
CEACAM5 Protein Human 重組人 CEACAM5 / CD66e 蛋白
C2重組人 C2 / Complement Component 2 蛋白 (Fc 標簽) Protein
HA Protein H3N2 重組甲型流感 H3N2 (A/Hong Kong/1/1968) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白
NTF3重組人 NTF3 / Neurotrophin 3 蛋白 Protein
細胞凍存步驟:
待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例；
1．細胞凍存時，棄去培養基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，細胞變圓脫落后，加入2ml培養基終止消化，可使用血球計數板計數。
2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。
3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
