基礎三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基(TSI)

絕大多數(shù)培養(yǎng)基是建立在*(BSS)基礎上，添加了氨基酸、維生素和其它與血清中濃度相似的營養(yǎng)物質(zhì)。zui廣泛應用的培養(yǎng)基是Eearle`s MEM 的混合物，其中含有13種必須氨基酸、8種維生素。而Ham`s F12 也包括非必須氨基酸，維生素的范圍亦很廣，另外常規(guī)含有無機鹽和代謝添加劑（例如核苷酸）。MEM/F12 這兩種培養(yǎng)基各取1/2，形成神經(jīng)生物學zui通用的培養(yǎng)基。Dulbecco`s改良培養(yǎng)基——DMEM，現(xiàn)應用于快速生長的細胞，同MEM含有相同的營養(yǎng)成分，但濃度高出2~4倍。選擇某種培養(yǎng)基，應仔細了解成分表，應知道大多數(shù)情形下培養(yǎng)基都有不足。例如，有些培養(yǎng)基在氨基酸中包括有*，而這種培養(yǎng)基雖廣泛用于神經(jīng)生物學領域，但它對某些對*敏感的可能有細胞外毒性損傷的神經(jīng)元而言，則并非*選擇，特別是如果神經(jīng)元生長在缺乏膠質(zhì)的環(huán)境中時。F12中含有*，據(jù)報道也有神經(jīng)毒效應。

三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基(TSI)制備方法：

1. 培養(yǎng)同源細胞（未克隆前時的同一細胞）至半?yún)R合狀態(tài)時，更換一次培養(yǎng)液，再繼續(xù)培養(yǎng)24~48小時后，吸出所有培養(yǎng)液。

2. 離心：3000~4000/分離心10分鐘，吸取上清液。

3. 濾過：再經(jīng)直徑0.22μm濾孔的濾膜過濾，低溫凍存貯備用；用時取1分適應培養(yǎng)基+2培養(yǎng)基混合使用。

生長因子絕大多數(shù)哺乳類胚胎神經(jīng)元有嚴格的營養(yǎng)要求，若不能提供適宜的生長因子或合適的因子組分，將會使絕大多數(shù)神經(jīng)元在體外培養(yǎng)的數(shù)天中死亡。解決這一問題有兩條思路，一是讓培養(yǎng)細胞提供自己的營養(yǎng)因子，二是在三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基(TSI)中加入純的生長因子。如果細胞混合物能在高密度時生長，所需的生長因子便會積累到可觀的數(shù)值，尤其當培養(yǎng)基很少變化時。若某種細胞混合物生長時有很少的營養(yǎng)需求，可保持培養(yǎng)基在一段時間里不作任何變動，以使營養(yǎng)（生長）因子積累，而zui后促使所需要的細胞類型能夠生長。但是，這種對營養(yǎng)（生長）因子自身倚賴性亦有弊端，因為通常在混合細胞群體中細胞很難有同比例增殖，某些細胞會因生長條件的貧乏而受限制。另外，這種方法只能進行相當高密度的細胞培養(yǎng)。因為培養(yǎng)基的條件在細胞的較低密度時變的不夠有效。不過某些時候純化神經(jīng)元群體的低密度培養(yǎng)可用條件培養(yǎng)基（經(jīng)過了高密度培養(yǎng)）進行，或在膠質(zhì)上生長的神經(jīng)元所用過的培養(yǎng)基來支持。

滿足神經(jīng)元營養(yǎng)需求的第二條途徑是向培養(yǎng)基中加入生長因子。通常用于組培的通用適宜因子是神經(jīng)生長因子NGF。不過，只有少數(shù)對這種蛋白質(zhì)有反應的細胞類型的細胞才能生長。

三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基(TSI)相關產(chǎn)品如下：J774A.1    單核細胞－巨噬細胞
C127    乳腺腫瘤
RAW264.7    單核細胞－巨噬細胞
F9    胚胎瘤
NG108-15    小鼠神經(jīng)細胞瘤×大鼠神經(jīng)膠質(zhì)細胞雜交細胞
C6    膠質(zhì)瘤
RH－35    肝癌
SHZ－88    乳腺癌
CBRH－7919    肝癌
PC-12    腎上腺嗜鉻細胞瘤
A431    表皮癌
QGY-7701    肝癌
A673    橫紋肌癌
QGY-7703    肝癌
Tca-8113    舌鱗癌
SMMC-7721    肝癌
Acc-2    涎腺腺樣囊性癌
786-O    腎透明細胞腺癌
Acc-3    涎腺腺樣囊性癌
PC-3    前列腺癌
KB    口腔表皮樣癌
T-24    膀胱變移細胞癌
HEp-2    喉表皮樣癌
SCaBER    膀胱鱗癌
CNE    鼻咽癌
Ho-8910    卵巢癌
TT    髓性甲狀腺癌
L1    卵巢癌
Bcap-37    乳腺癌
HeLa    宮頸癌
ZR-75-30    乳腺癌
HeLa229    宮頸癌
MCF-7    乳腺腺癌