細(xì)胞名稱 人胚肺成纖維細(xì)胞；IMR-90

形態(tài)特性 成纖維細(xì)胞

生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)

特征特性 W.W. Nichols及其同事從一位16周女?huà)氲姆沃腥〔模⒘巳硕扼w成纖維細(xì)胞株IMR-90。 [22381] 分裂潛能，病毒感受性和其它性質(zhì)都得到了充分研究，因而這株細(xì)胞可以作為WI-38或其它標(biāo)準(zhǔn)人肺細(xì)胞株的替代株。 有報(bào)道稱這株細(xì)胞在表現(xiàn)出衰老前可倍增58次。 [22381]

培養(yǎng)條件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%

傳代方法 消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長(zhǎng)滿。

傳代情況 P(11+5)

凍存條件 *培養(yǎng)基+8%DMSO

支原體檢測(cè) 陰性

STR

同工酶

染色體

產(chǎn)品圖片：

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類(lèi)型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

匹克氏肉湯基礎(chǔ) 規(guī)格:  100g 作用：  用于溶血性鏈球菌的增菌培養(yǎng)(參考GB/T4789.28－2003 中4.62，GB/T4789.11－2003)。 英文名稱： CD36
肉浸液肉湯 規(guī)格:  250g 作用：  用于金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌和蠟樣芽孢桿菌的培養(yǎng)（GB標(biāo)準(zhǔn)） 英文名稱： KLK11
葡萄糖肉浸液肉湯 規(guī)格:  250g 作用：  用于溶血性鏈球菌及其它營(yíng)養(yǎng)要求較高的細(xì)菌的增菌培養(yǎng)(GB/T4789.28－2003 中4.1 GB/T4789.11－2... 英文名稱： CD97
哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基 規(guī)格:  250g 作用：  用于營(yíng)養(yǎng)要求較高的細(xì)菌的培養(yǎng)及溶血試驗(yàn)，還用于藥品中梭菌的檢測(cè)。(《中華人民共和國(guó)藥典》201... 英文名稱： NTRK3
血瓊脂培養(yǎng)基基礎(chǔ) 規(guī)格:  250g 作用：  加入脫纖維羊血或兔血，制成血瓊脂培養(yǎng)基，用于營(yíng)養(yǎng)要求較高的細(xì)菌的培養(yǎng)及溶血試驗(yàn)(GB 4789.10－... 英文名稱： HA
胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基 規(guī)格:  250g 作用：  可廣泛應(yīng)用于細(xì)菌的培養(yǎng)，特別用于消毒劑消毒效果的測(cè)試、金黃色葡萄球菌的非選擇性增菌培養(yǎng)及蠟... 英文名稱： HA
Fraser肉湯增菌液FB1配套試劑 規(guī)格:  2x5支 作用：  試劑A和試劑B各一支添加于225ml（026080）中配成FB1增菌液。 英文名稱： SPARCL1
PALCAM瓊脂凍干配套試劑 規(guī)格:  10支 作用：  每支添加于100ml（026070）中配成PALCAM瓊脂。 英文名稱： IL1RL1
李氏增菌液LB2凍干配套試劑 規(guī)格:  10支 作用：  每支添加于200ml（026040）中配成LB2增菌液。 英文名稱： IL13RA1
李氏增菌液LB1凍干配套試劑 規(guī)格:  10支 作用：  每支添加于225ml（026040）中配成LB1增菌液。 英文名稱： PECAM1
EB增菌液凍干配套試劑 規(guī)格:  10支 作用：  每支添加于225ml（026010）中配成EB增菌液。 英文名稱： TNF

MAPK-1/2  絲裂原活化蛋白激酶（抗原）

MAP-2(microtubule associated protein 2 0.5mg    微管相關(guān)蛋白2抗原 MAP-2(microtubule associated protein 2)  微管相關(guān)蛋白2抗原

MAP1LC3A(microtubule-associated protein 1 light chain 3 0.5mg    自噬微管相關(guān)蛋白輕鏈3抗原 MAP1LC3A(microtubule-associated protein 1 light chain 3)  自噬微管相關(guān)蛋白輕鏈3抗原

MAP1A/Mtap1a(microtubule associated protein 1A 0.5mg    微管相關(guān)蛋白1A抗原 MAP1A/Mtap1a(microtubule associated protein 1A)  微管相關(guān)蛋白1A抗原

MAGE-1  黑色素瘤相關(guān) 0.5mg MAGE-1  黑色素瘤相關(guān)

人胚肺成纖維細(xì)胞；IMR-90Anti-AT1R/AGTR1/FITC  熒光素標(biāo)記血管緊張素Ⅱ-1型受體抗體IgG

Anti-CD93/C1qrp/FITC  熒光素標(biāo)記CD93抗體IgG

Anti-CD94/KLRD1/FITC  熒光素標(biāo)記NK細(xì)胞表面抑制性受體CD94抗體IgG

Anti-CD97/FIT

操作方法:
1. 從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA (質(zhì)粒或連接產(chǎn)物) 并用手EP管底輕輕混勻 (避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入0.9 mL室溫S.O.C.或LB培養(yǎng)基(S.O.C.營(yíng)養(yǎng)豐富，可提高轉(zhuǎn)化效率)。
4. 37℃，225 rpm復(fù)蘇60分鐘或30℃，225 rpm復(fù)蘇90分鐘。
(當(dāng)質(zhì)粒中含有不穩(wěn)定片段時(shí)，30℃培養(yǎng)可降低錯(cuò)誤重組的概率，若轉(zhuǎn)化control pUC19計(jì)算轉(zhuǎn)化效率，則需37℃，225 rpm復(fù)蘇60分鐘）
5. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的S.O.C. 或LB培養(yǎng)基上。