ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的高效催化作用相結(jié)合起來(lái)的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。
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人Klotho蛋白(KL)測(cè)定盒
Human Klotho (KL) ELISA
1.2.2 抗體的產(chǎn)生 機(jī)體受抗原刺激后，B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生相應(yīng)的抗體。含有抗體的血清稱為抗血清（antiserum）。每一系B細(xì)胞只產(chǎn)生針對(duì)某一抗原決定簇的抗體。如將多種抗原或含有多個(gè)抗原決定簇的抗原注入機(jī)體，則將由多系的B細(xì)胞產(chǎn)生相應(yīng)的多種抗體，這些抗體均存在于免疫血清中。免疫測(cè)定中所用的抗血清一般用抗原免疫兔、羊或馬制得。產(chǎn)生抗體的B細(xì)胞可在體外與繁殖力強(qiáng)的腫瘤細(xì)胞融合成雜交瘤細(xì)胞。將單個(gè)雜交瘤細(xì)胞分離，在體內(nèi)或體外培養(yǎng)而分泌的抗體單克隆抗體（monoclonal antibody，McAb或Mab）。單克隆抗體僅針對(duì)一種抗原決定簇，具有很高的特異性。單克隆抗體通常用抗原免疫小鼠制備。將免疫的脾細(xì)胞（含產(chǎn)生抗體的B細(xì)胞）與小鼠腫瘤細(xì)胞融合，分離雜交瘤細(xì)胞，接種于小鼠腹腔，產(chǎn)生的腹水中含有濃度很高的單克隆抗體。1.3 抗原抗體反應(yīng)1.3.1 可逆性 抗原與抗體結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物的過(guò)程是一種動(dòng)態(tài)平衡，其反應(yīng)式為：Ag+Ab→Ag·Ab。.抗體的親和力（affinity）是抗原抗體間的固有結(jié)合力，可以平衡常數(shù)K表示：K=[Ag·Ab]／[Ag][Ab]。Ag·Ab的解離程度與K值有關(guān)。高親和力抗體的抗原結(jié)合點(diǎn)與抗原的決定簇在空間構(gòu)型上非常適合，兩者結(jié)合牢固，不易解離。解離后的抗原或抗體均能保持原有的結(jié)構(gòu)和活性，因此可用親和層析法來(lái)提純抗原或抗體。在抗血清中，特異性的IgG抗體僅占總IgG中的極小部分。用親和層析法提取的特異性抗體，稱為親和層析純抗體，應(yīng)用于免疫測(cè)定中可得到更好的效果。1.3.2 zui適比例 在恒定量的抗體中加入遞增量的抗原形成抗體復(fù)合物（沉淀）的量見(jiàn)圖1-4。曲線的高峰部分是抗原抗體比例zui合適的范圍，稱為等價(jià)帶（zone of equivalence）。在等價(jià)帶前后分別為抗體過(guò)剩帶和抗原過(guò)剩帶。如果抗原或抗體極度過(guò)剩，則無(wú)沉淀物形成，在免疫測(cè)定中稱為帶現(xiàn)象（zone phenomenon）。抗體過(guò)量稱為前帶（prezone），抗原地過(guò)量稱為后帶（postzone）。在用免疫學(xué)方法測(cè)定抗原時(shí)，應(yīng)使反應(yīng)系統(tǒng)中有足夠的抗體量，否則測(cè)得的量會(huì)小于實(shí)際含量，甚至出現(xiàn)假陰性。
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