細(xì)胞名稱:UMNSAH/DF-1（雞胚成纖維細(xì)胞）實驗方法

細(xì)胞形態(tài)

成纖維細(xì)胞樣

背景描述

UMNSAH/DF-1細(xì)胞是起源于10日齡的ELL-0雞蛋的雞細(xì)胞株，自發(fā)永生化。分離原代雞胚成纖維細(xì)胞并在培養(yǎng)液中培養(yǎng)，傳代直到衰老；在衰老過程中離心以保持細(xì)胞培養(yǎng)在30%到60%滿；不衰老的克隆進(jìn)行鑒定并傳代不少于30次。在軟瓊脂上沒有觀察到克隆增殖，說明UMNSAH/DF-1細(xì)胞是永生化而沒有轉(zhuǎn)化。UMNSAH/DF-1細(xì)胞可作為病毒增殖、重組蛋白表達(dá)和重組病毒的基質(zhì)。

生長培養(yǎng)基

DMEM高糖(貨號:PM150210)＋10% FBS(貨號:164210-500)＋1% P/S(貨號:PB180120)

培養(yǎng)條件

氣相：空氣，95%；CO2，5%

溫度：39℃（Max.40℃，Min.38℃）

優(yōu)勢：
1、細(xì)胞株種類齊全，包括腫瘤細(xì)胞、正常細(xì)胞、耐藥細(xì)胞株，如：人滑膜細(xì)胞，人胃癌細(xì)胞，人細(xì)胞，人腎近曲小管上皮細(xì)胞，肝癌細(xì)胞，心肌細(xì)胞，子宮內(nèi)膜細(xì)胞等
2、*，專業(yè)的細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)指導(dǎo)
3、購買本公司的細(xì)胞株，免費復(fù)蘇
4、客戶收到細(xì)胞后一天回傳細(xì)胞圖片，三天回傳細(xì)胞生長狀態(tài)圖片，五天內(nèi)有問題公司負(fù)責(zé)重發(fā)，超過五天時限至一個月內(nèi)重發(fā)細(xì)胞收半價，超過一個月重發(fā)全額收費。
5、經(jīng)濟(jì)、實惠、可靠，完善、穩(wěn)定的實驗體系，優(yōu)秀的科研隊伍，*的實驗設(shè)備、準(zhǔn)確可靠的實驗結(jié)果，是您可靠的合作伙伴
6、此外，我們還可以提供Elisa試劑盒、細(xì)胞株、抗體、血清、培養(yǎng)基、常用生化試劑、耗材。
操作步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
冷凍保存方法一：冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽*儲存。
冷凍保存方法二：冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期儲存。-20℃不可超過1小時，以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，也可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

糖原合酶激酶-3β抗體 GSK-3 beta (NT)
三磷酸鳥苷環(huán)水解酶抗體 GTP cyclohydrolase 1
促代謝型*受體5抗體 mGluR5
生長調(diào)節(jié)致癌基因-1抗體GROa GRO Alpha
G蛋白偶合受體激酶1抗體 GRK1
促胃泌素釋放肽抗體 Gastrin Releasing Peptide
磷酸化G蛋白通路抑制蛋白1抗體 phospho-GPS1(Ser474)
腦糖原磷酸化酶抗體 GPBB
G氨基丁酸受體3抗體 GABR B3
G氨基丁酸受體α3抗體 GABA A Receptor alpha 3
GEN1蛋白抗體 GEN1
*磷酸核糖基焦磷酸酰胺基轉(zhuǎn)移酶 Glutamine PRPP amidotransferase
α-半乳糖苷酶抗體 Galactosidase alpha
蛋白偶聯(lián)受體55抗體 GPR55
生長抑制DNA損傷基因45γ抗體 GADD45γ GADD45 gamma
生長停滯特異性蛋白2家族3抗體 GAS2L3
顆粒酶K抗體 Granzyme K
甘油磷酸二酯酶磷酸結(jié)構(gòu)域5抗體 GDPD5
γ谷氨酰轉(zhuǎn)移酶抗體 GGT1
G1氨基丁酸A型受體α1抗體 GABA A Receptor alpha 1
*脫羧酶-65抗體 GAD65
*脫羧酶-65抗體(C端） GAD65
半乳糖凝集素3抗體 Galectin 3
神經(jīng)生長相關(guān)蛋白43 GAP43
3-磷酸甘油醛脫氫酶（兔來源免疫組化用抗體） GAPDH
3-磷酸甘油醛脫氫酶單克隆抗體(內(nèi)參抗體) GAPDH(3E12)-Loading Control
生長停滯特異性蛋白2家族1抗體 GAS2L1
G蛋白偶聯(lián)受體97抗體 GPR97
G蛋白結(jié)合蛋白7抗體 GBP7
綠色熒光蛋白抗體 GFP
綠色熒光蛋白抗體 GFP

性比色法定量檢測試劑盒  0.2ml
ai-SPA-1/SIPA-1  熒光素標(biāo)記抗信號感應(yīng)增殖相關(guān)蛋白 1抗體IgG 植物果膠甲酯酶（pectin methylesterase；PME）活性熒光定量檢測試劑盒  0.2ml
Ai-SPAG5/map126 /FITC  熒光素標(biāo)記抗相關(guān)抗原5抗體IgG 酵母果膠甲酯酶（pectin methylesterase；PME）活性熒光定量檢測試劑盒  0.2ml
Ai-SPARC/FITC  熒光素標(biāo)記富含半*的酸性分泌蛋白抗體IgG 細(xì)菌果膠甲酯酶（pectin methylesterase；PME）活性熒光定量檢測試劑盒  0.2ml
Ai-SP-B/FITC  熒光素標(biāo)記肺表面活性蛋白B抗體IgG 植物總吲哚-3-乙酸（IAA）熒光定量檢測試劑盒（包括萃取）  0.2ml
Ai-SP-D/FITC  熒光素標(biāo)記肺表面活性蛋白D抗體IgG 植物游離吲哚-3-乙酸（IAA）熒光定量檢測試劑盒（包括萃取）  0.2ml
Ai-Spectrin- Alpha/FITC  熒光素標(biāo)記血影蛋白/收縮蛋白抗體IgG 植物結(jié)合吲哚-3-乙酸（IAA）熒光定量檢測試劑盒（包括萃取）  0.2ml
Ai-SPHK1/FITC  熒光素標(biāo)記鞘氨醇激酶1抗體IgG 植物彌散吲哚-3-乙酸（IAA）熒光定量檢測試劑盒（包括萃取）  0.2ml
Ai-SPHK2/FITC  熒光素標(biāo)記鞘氨醇激酶2抗體IgG 植物總吲哚-3-乙酸（IAA）比色法定量檢測試劑盒（包括萃取）  0.2ml
Ai-Spindlin 1/SPIN-2/FITC  熒光素標(biāo)記Spindlin 1/SPIN-2 腫瘤形成相關(guān)基因抗體IgG 植物游離吲哚-3-乙酸（IAA）比色法定量檢測試劑盒（包括萃取）  0.2ml
Ai-SPY /FITC  熒光素標(biāo)記抗spindly抗體IgG 植物結(jié)合吲哚-3-乙酸（IAA）比色法定量檢測試劑盒（包括萃取）  0.2ml
Ai-SRC /FITC  熒光素標(biāo)記整合素樣金屬蛋白酶與*1型-7抗體IgG 植物彌散吲哚-3-乙酸（IAA）比色法定量檢測試劑盒（包括萃取）  0.2ml
Ai-phospho-Src (Tyr418)/FITC   熒光素標(biāo)記磷酸化Src原癌基因抗體IgG Murashige & Skoog基礎(chǔ)培養(yǎng)基  0.2ml
Ai-SREBP-1/FITC  熒光素標(biāo)記*調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白1抗體IgG Murashige & Skoog*培養(yǎng)基