1、感受態細胞的概念
　　
　　重組DNA分子體外構建完成后，必須導入特定的宿主（受體）細胞，使之無性繁殖并表達外源基因或直接改變其遺傳性狀，這個導入過程及操作統稱為重組DNA分子的轉化。
　　
　　在原核生物中，轉化是一個較普遍的現象，在細胞間轉化是否發生，一方面取決于供體菌與受體菌兩者在進化過程中的親緣關系，另一方面還與受體菌是否處于一種感受狀態有著很大的關系。
　　
　　所謂的感受態，即指受體（或者宿主）zui易接受外源dna片段并實現其轉化的一種生理狀態，它是由受體菌的遺傳性狀所決定的，同時也受菌齡、外界環境因子的影響。cAMP可以使感受態水平提高一萬倍，而Ca2+也可大大促進轉化的作用。細胞的感受態一般出現在對數生長期，新鮮幼嫩的細胞是制備感受態細胞和進行成功轉化的關鍵。
　　
　　制備出的感受態細胞暫時不用時，可加入占總體積15%的無菌甘油或-70℃保存（有效期6個月）。
　　
　　2、轉化的概念及原理
　　
　　在基因克隆技術中，轉化特指將質粒dna或以其為載體構建的重組DNA導入細菌體內，
　　
　　使之獲得新的遺傳特性的一種方法。它是微生物遺傳、分子遺傳、基因工程等研究領域的基本實驗技術之一。
　　
　　受體細胞經過一些特殊方法（如：電擊法，CaCl2等化學試劑法）處理后，使細胞膜的通透性發生變化，成為能容許外源DNA分子通過的感受態細胞。進入細胞的DNA分子通過復制、表達實現遺傳信息的轉移，使受體細胞出現新的遺傳性狀。
　　
　　大腸桿菌的轉化常用化學法（CaCl2法），該法zui先是由Cohen于1972年發現的。其原理是細菌處于0℃，CaCl2的低滲溶液中，菌細胞膨脹成球形，轉化混合物中的DNA形成抗DNase的羥基-鈣磷酸復合物粘附于細胞表面，經42℃短時間熱沖擊處理，促使細胞吸收DNA復合物，在豐富培養基上生長數小時后，球狀細胞復原并分裂增值，被轉化的細菌中，重組子中基因得到表達，在選擇性培養基平板上，可選出所需的轉化子。
　　
　　Ca2+處理的感受態細胞，其轉化率一般能達到5×106~2×107轉化子/ug質粒DNA，可以滿足一般的基因克隆試驗。如在Ca2+的基礎上，聯合其它的二價金屬離子（如Mn2+、Co2+）、DMSO或還原劑等物質處理細菌，則可使轉化率提高100~1000倍。
　　
　　化學法簡單、快速、穩定、重復性好，菌株適用范圍廣，感受態細菌可以在-70℃保存，因此被廣泛用于外源基因的轉化。
　　
　　除化學法轉化細菌外，還有電擊轉化法，電擊法不需要預先誘導細菌的感受態，依靠短暫的電擊，促使DNA進入細菌，轉化率zui高能達到109~1010轉化子/ug閉環DNA。因操作簡便，愈來愈為人們所接受。
　　
　　3、感受態細胞制備及轉化中的影響因素
　　
　　⑴、細胞的生長狀態和密度
　　
　　從-70℃或-20℃甘油保存的菌種中直接轉接用于制備感受態細胞的菌液。不要用已
　　
　　經過多次轉接，及貯存在4℃的培養菌液。細胞生長密度以每毫升培養液中的細胞數在5×107個左右為佳。即應用對數期或對數生長前期的細菌，可通過測定培養液的OD600控制。對TG1菌株，OD600為0．5時，細胞密度在5×107個/ml左右。（應注意OD600值與細胞數之間的關系隨菌株的不同而不同）。密度過高或不足均會使轉化率下降。
　　
　　此外，受體細胞一般應是限制-修飾系統缺陷的突變株，即不含限制性內切酶和甲基化酶的突變株。并且受體細胞還應與所轉化的載體性質相匹配。
　　
　　⑵、質粒DNA的質量和濃度
　　
　　用于轉化的質粒DNA應主要是超螺旋態的，轉化率與外源DNA的濃度在一定范圍內成正比，但當加入的外源DNA的量過多或體積過大時，則會使轉化率下降。一般地，DNA溶液的體積不應超過感受態細胞體積的5%，1ng的cccDNA即可使50ul的感受態細胞達到飽和。
　　
　　對于以質粒為載體的重組分子而言，分子量大的轉化效率低，實驗證明，大于30kb的重組質粒將很難進行轉化。此外，重組DNA分子的構型與轉化效率也密切相關，環狀重組質粒的轉化率較分子量相同的線性重組質粒高10~100倍，因此重組DNA大都構成環狀雙螺旋分子。
　　
　　整個操作過程均應在無菌條件下進行，所用器皿，如離心管，移液槍頭等是新的，并經高壓滅菌處理。所有的試劑都要滅菌，且注意防止被其它試劑、DNA酶或雜DNA所污染，否則均會影響轉化效率或雜DNA的轉入。
　　
　　⑸、整個操作均需在冰上進行，不能離開冰浴，否則細胞轉化率將會降低。