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推薦:染色體的標(biāo)本制作及其組型實(shí)驗(yàn)

時(shí)間:2016-11-7閱讀:418
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在真核生物中, 染色體的數(shù)量和形態(tài)具有物種的特異性一直可以作為此物種分類的基本依據(jù)之一。染色體作為遺傳物質(zhì)-DNA的載體, 對(duì)生物的遺傳、變異、進(jìn)化和個(gè)體發(fā)生, 以及細(xì)胞的增殖和生理過(guò)程的平衡控制等都具有十分重要的意義。每一個(gè)物種的細(xì)胞一般都有一定數(shù)目、形狀和大小的染色體。將體細(xì)胞核中全部染色體按照其大小、著絲粒位置,以至帶型有序地排列起來(lái),此模式圖象排列即為核型(karyotype)或染色體組型。核型分析均是以中期染色體為標(biāo)準(zhǔn),對(duì)制作出的染色體標(biāo)本進(jìn)行照相以獲得染色體的顯微圖象,并將其剪裁排列即成。華裔學(xué)者莊有興(Joe Hin Tjio)和瑞典學(xué)者A.Levan合作, 利用低滲法研究胎兒肺組織的染色體標(biāo)本制做方法,終于在1956年確定了人類的染色體數(shù)目是46條,而不是前人所主張的48條,這為后來(lái)的人類核型研究奠定了基礎(chǔ)。
1.實(shí) 驗(yàn) 目 的
1.1 初步掌握動(dòng)物骨髓染色體標(biāo)本制備基本過(guò)程,了解操作步驟的原理。
1.2了解常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物染色體的數(shù)目及特點(diǎn)。通過(guò)組型實(shí)驗(yàn),掌握染色體組型的基本方法
2.實(shí) 驗(yàn) 原 理
凡細(xì)胞處于活躍增殖狀態(tài),或者經(jīng)過(guò)各種處理后,細(xì)胞就可進(jìn)入分裂的任何動(dòng)物組織,均可用于染色體分析。在正常動(dòng)物體內(nèi),精巢和骨髓均為是活躍分裂的組織。給動(dòng)物注射一定劑量的秋水仙堿即可使許多處于分裂的細(xì)胞停滯于中期,然后采用常規(guī)空氣干燥法制備染色體,即可得到大量可分析的染色體標(biāo)本。本方法簡(jiǎn)便、可靠,不需要經(jīng)體外培養(yǎng)和無(wú)菌操作,易于推廣。骨髓細(xì)胞是用于動(dòng)物細(xì)胞遺傳學(xué)研究很好的材料。但在取材方面,精巢又比骨髓要簡(jiǎn)易一些,故本實(shí)驗(yàn)也選用小鼠的精巢為實(shí)驗(yàn)材料。
對(duì)于小鼠精巢染色體標(biāo)本的制作,一般包括以下幾個(gè)要點(diǎn):
1. 用一定劑量的秋水仙素破壞紡錘絲的形成,使細(xì)胞分裂停滯在中期, 使中期染色體停留在赤道面處;
2. 用低滲法使將細(xì)胞膨脹, 以至于在滴片時(shí)細(xì)胞被脹破, 使細(xì)胞的染色體鋪展到載玻片上;
3. 空氣干燥法可使使細(xì)胞的染色體在載片上展平, 經(jīng)Giemsa染色后便可觀察到染色體的顯微圖象。
染色體組型又名核型,是指根據(jù)染色體的長(zhǎng)度、形態(tài)和著絲粒的位置將中期染色體依照所規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)順序和組次予以系統(tǒng)排列而成的模式圖,它代表了一個(gè)個(gè)體或物種的染色體特征。進(jìn)行染色體組型主要依據(jù)有以下幾個(gè)參數(shù): 1. 相對(duì)長(zhǎng)度(relative length): 指單個(gè)染色體的長(zhǎng)度與包括x染色體在內(nèi)的單倍體染色體總長(zhǎng)度之比,相對(duì)長(zhǎng)度=單條染色體的長(zhǎng)度/(單倍體常染色體+X染色體)的總長(zhǎng)度×100%。2. 臂指數(shù)(arm index): 指染色體長(zhǎng)臂與短臂的比率,臂指數(shù)=長(zhǎng)臂/短臂。3. 著絲粒指數(shù)(centromere index): 指短臂占整個(gè)染色體長(zhǎng)度的比率,著絲粒指數(shù)=短臂/整個(gè)染色體長(zhǎng)度×100%, 該比率決定了著絲粒在染色體中的相對(duì)位置。4. 染色體的臂數(shù): 對(duì)于端部著絲粒染色體,臂數(shù)為1,其它為2。根據(jù)Levan(1964)所制定的人類染色體標(biāo)準(zhǔn),臂指數(shù)在1.0~1.7之間的染色體為中央著絲粒染色體,在1.7~3.0之間為亞中央著絲粒染色體,在3.0~7.0間為亞端部著絲粒染色體,大于7.0為端部著絲粒染色體;著絲粒指數(shù)在50.0~37.5之間的染色體為中央著絲粒染色體,在37.5~25.0之間為亞中央著絲粒染色體,在25.0~12.5之間為亞端部著絲粒染色體,小于12.5為端部著絲粒染色體。

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