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武漢艾美捷科技有限公司
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Worthington果膠酶的特性及測定方案

時間:2022-7-26閱讀:36
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艾美捷Worthington 純化果膠酶是一種多組分制劑,可高效解聚具有不同酯化程度的植物果膠。該產品含有大量的半纖維素酶、纖維素酶、果膠酯酶和木聚糖酶活性,與果膠裂解酶和多聚半乳糖醛酸酶協同作用消化植物細胞壁組織。當與 Worthington 純化的纖維素酶一起使用時,已發現純化的果膠酶在玉米、大豆、紅甜菜、向日葵、番茄和柑橘等幾種植物系統中非常成功地產生了高產量的活原生質體。一般來說,濃度范圍為 0.1% 至 0.5% 的果膠酶(伴隨著 0.5% 至 1.5% 的纖維素酶)在 24°至 37°下使用 至 16 小時會產生良好的效果。

 

主要的:  

果膠裂解酶 (4.2.2.10)

多聚半乳糖醛酸酶 (3.2.1.15)

半乳聚糖 1,4-α-半乳糖醛酸酶 (3.2.1.67)

 

次要的:

纖維素酶(內切纖維素酶(3.2.1.4)、外切纖維素酶( 3.2.1.91) 、纖維二糖酶(3.2.1.21))

半纖維素酶 (3.1.1.73)

果膠酯酶 (3.1.1.11)

木聚糖酶 (3.2.1.8)

 

艾美捷Worthington 黑曲霉果膠酶的特性:

除了其高酶活性外,純化的果膠酶還專門用于植物原生質體培養研究。使用定量測量D-半乳糖醛酸從多聚半乳糖醛酸中釋放的方法測定酶。該方法基于使用鹽酸新銅堿顯色試劑測定法測定還原糖。當與 Worthington 純化的纖維素酶一起使用時,已發現純化的果膠酶可用于在幾種植物系統(例如玉米、大豆、紅甜菜、向日葵、番茄和柑橘)中產生良好產量的活原生質體。一般來說,濃度范圍為 0.1% 至 0.5% 的果膠酶(伴隨著 0.5% 至 1.5% 的纖維素酶)在 24°至 37°下使用 至 16 小時會產生良好的效果。

 

儲存儲存于 2-8°C。防潮。如果不一次使用整個瓶子,在到達時稱重成一次性等分試樣,并蓋緊、干燥、冷藏保存。材料非常吸濕,如果暴露在濕氣中會變得發粘且難以稱重。

 

穩定性/儲存: 防潮。如果不一次使用整個瓶子,在到達時稱重成一次性等分試樣,并在 2-8°下蓋緊并干燥儲存。材料非常吸濕,如果暴露在濕氣中會變得發粘且難以稱重。

 

單位定義:一個單位在 37°CpH 5.0 下每分鐘從聚半乳糖醛酸中釋放 1µmole D-半乳糖醛酸。

 

技術說明:果膠酶具有J強的吸水性;儲存干燥以防受潮。

 

艾美捷Worthington果膠酶的測定

方法:在 37°CpH 5.0 條件下,一個單位每分鐘從聚半乳糖醛酸中釋放 1 umole D-半乳糖醛酸。

 

試劑:

0.1 M 檸檬酸/磷酸鹽緩沖液(測定緩沖液),pH 5.0

顏色試劑 A:將 40g 無水 Na 2 CO 3溶解 在 600 ml 試劑級 H 2 O 中。加入 16 g gan氨酸并攪拌直至溶解。加入 0.450 gm CuSO 4 5H 2 O,攪拌至溶解。用試劑級 H 2 O 加至 升。

顏色試劑 B:將 1.2 g neocuprine - HCl 溶解在 升 H 2 O 級試劑中。在 4°下儲存在棕色瓶中。

D-半乳糖醛酸標準品,1mg/ml

0.5% 聚半乳糖醛酸底物:

在熱板上加熱 500 ml 檢測緩沖液。在加熱和攪拌的同時,緩慢加入 2.5 gm 聚半乳糖醛酸。加熱并攪拌直至溶解。它會有點粘稠和不透明。不要讓溶液沸騰。如有必要,冷卻并恢復音量。儲存于 4°C

 

酶:

每天化妝新鮮。將溶液放在冰上直至使用。在檢測緩沖液中連續稀釋至 0.01 mg/ml

 

程序:

準備三個試管,每個試管含有 1 ml 緩沖液和 6 ml 底物(試劑空白)。準備三個試管,每個試管含有 6 ml 底物和 1 ml 0.1 mg/ml 的酶樣品(測試)。準備三個試管,每個試管含有 6 ml 緩沖液和 1 ml 濃度為 0.1 mg/ml 的酶樣品(樣品空白)。

 

將試管在 37°水浴中孵育 60 分鐘 ± 分鐘。使用 10 μ至 125 μ的 D-半乳糖醛酸標準品將標準曲線管分裝,一式三份。

 

試管孵育 60 分鐘后,立即將支架放入冰水中以停止反應。從每管 100 μ中分裝到另一組管中(也在冰上)。向每個反應管和標準管中加入 2 ml Color Reagent A 和 2 ml Color Reagent B。倒置充分混合。將機架放入沸水浴中 13 分鐘 ±分鐘。冷卻試管,然后加入 2ml H 2 O。倒置充分混合。使用一次性比色皿讀取 A 450與水空白的吸光度。不要使用流通池;橙色附著在玻璃上。計算每組一式三份的平均吸光度。

 

計算:

繪制標準曲線:

 

71.jpg


計算變化率。曲線應該是線性的,直到 100 ug D-半乳糖醛酸,如果不是,用新鮮試劑重復曲線。

 

Worthington主要研究覆蓋生物技術和生命科學研究,診斷,生物制藥和生物加工應用的高質量純化酶,蛋白質,核酸和試劑盒。艾美捷科技是Worthington的中國代理商,為科研工作者提供優質的產品與服務。


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