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Worthington磷脂酶A2研究丨磷脂酰膽2-乙酰水解酶

時間:2022-7-27閱讀:91
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磷脂酶 A2 代表一類熱穩定的鈣依賴性酶,可催化 3-n-磷酸甘油酯的 2-酰基鍵水解。這種酶被命名為磷脂酶 A2 以表示其 2-酰基特異性 (Uthe 1971)

 

已從胰腺、蛇和蜜蜂毒液中分離出磷脂酶 A2。福斯特等人。(1986),陳等人。(1982), Coulard等人。(1987 年)和 Horigome等人。(1987 年)關于血小板磷脂酶 A2 的報告。Verheij等人已經報道了人類胰腺 PLA2 的一級結構。(1983 年)。

 

磷脂酶參與脂質代謝,是生物膜結構-功能關系的重要探針。道森 1973 年)。

 

艾美捷Worthington 磷脂酶 A2化學性質:

組成:

兩種表現出磷脂酶 活性的蛋白質(A 2- α、A 2- β)已從Crotalus adamanteus中分離出來(Saito 和 Hanahan 1962,以及 Wells 和 Hanahan 1969)。每種蛋白質都由二聚體亞基組成(Wells 1971)。這兩種蛋白質具有相似的活性,但在色譜和電泳上是不同的。海因里克森等人。(1977) 報道了這兩種酶的特別結構特征和磷脂酶 A2-α 的完整氨基酸序列。這兩個亞基在一個氨基酸上不同; A 2- α 在殘基 117 處含有gu氨酰胺,而酸性更強 的 A 2- β 在該殘基處含有gu氨酸


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蛋白質登錄號:
P00623 

分子量:30,000 (Wells 1969)

消光系數:  消光系數= 22.7 (Wells 1969)

等電點:A-α 和 A-β 分別為 4.55 和 4.40 (Saito 1962)

活化劑:鈣離子 (Dennis 1973)

抑制劑:鋅、鋇和錳離子(Golec等人1992 和 Uthe 1971

特異性:該酶特異性催化 L- α 磷酸甘油酯的β-脂肪酯鍵的水解 (Van Deenen 1963)

 

艾美捷Worthington 磷脂酶 A2 檢測

Method : 源自滴定測定程序的磷脂酶 A2 制劑的活性值可能*取決于luan磷脂的來源和類型、其作為底物乳液的制備、反應混合物的其他組分以及使用的方法學/儀器。文獻中報道的高純度毒液磷脂酶 A2 的值范圍為 200 至 3000 單位/mg。分析系統之間的比較是困難的。已發現以下測定在我們的實驗室中是可重復的。在特定條件下,一個單元在 pH 8.9 和 25°C 下每分鐘從luan磷脂乳液中釋放 1 個微摩爾可滴定脂肪酸。

 

試劑

0.1 M 氯化鈣

1.0 M 氯化鈉

luan磷脂乳液:在 250 ml 燒杯中稱取 4.0 克試劑級大豆luan磷脂,加入 30 ml 1.0 M 氯化鈉、10 ml 0.1 M 氯化鈣和 100 ml 試劑級水。在 4°C 下攪拌 30 分鐘后,在 Branson 超聲波儀或同等設備上以最大功率對混合物進行 10 分鐘的超聲波處理。用試劑級水稀釋至終體積為 200 ml

0.01-0.02 N NaOH - 標準化

 

將酶以 1.0 mg/ml 的濃度溶解在試劑級水中。在運行測定時將此儲備溶液保持在冰上。使用前立即在試劑級水中進行進一步稀釋。

 

程序

可以使用自動滴定儀或實驗室 pH 計進行滴定。反應容器應保持在 25°C

 

空白率測定:將 15 ml luan磷脂乳液移入 25°C 的反應容器中。將 pH 值調節至 8.9,并在獲得恒定速率后記錄將 pH 值保持在 8.9 3-5 分鐘所需的滴定劑體積。將空白速率"確定為從曲線的最后線性部分每分鐘添加的滴定劑體積。

 

樣品測定:在上述乳液中加入適當稀釋的酶。記錄將 pH 值保持在 8.9 4-5 分鐘所需的滴定劑量。從曲線的線性部分確定采樣率"為每分鐘添加的滴定劑體積。

 

Worthington核心酶:包括:膠原蛋白酶,脫氧核糖核酸酶I,彈性蛋白酶,木瓜蛋白酶,核糖核酸酶等。

 

Worthington主要研究覆蓋生物技術和生命科學研究,診斷,生物制藥和生物加工應用的高質量純化酶,蛋白質,核酸和試劑盒。艾美捷科技是Worthington的中國代理商,為科研工作者提供優質的產品與服務。


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