Fluo-4 的膜滲透 AM 酯形式，可通過孵育進(jìn)入細(xì)胞。由于 AM 酯的水溶性相對較低，溫和的去污劑Pluronic® F-127（目錄號 59004）通常用作分散劑以促進(jìn)細(xì)胞負(fù)載。Fluo-4, AM ester本身不與 Ca 2+結(jié)合，但一旦進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，它很容易被內(nèi)源性酯酶水解成 Fluo-4。Fluo-4, AM ester通常用于在高通量藥物篩選中測量細(xì)胞內(nèi)鈣。

Fluo-4 是 Fluo-3 的類似物，其中兩個(gè)氯取代基被氟取代，這導(dǎo)致 488 nm 處的熒光激發(fā)增加，從而產(chǎn)生更高的熒光信號。Fluo-4 在 494 nm 處具有最大吸收，因此可被氬離子激光激發(fā)。Fluo-4 在沒有 Ca 2+存在的情況下基本上是非熒光的，但在 Ca 2+結(jié)合時(shí)熒光增加至少 100 倍。此外，由于 Fluo-4 比 fura-2 和 indo-1 更弱地結(jié)合 Ca 2+（更高的 Kd），因此它對于測量Ca 2+尖峰期間的高瞬時(shí) Ca 2+濃度更有用。

艾美捷Fluo-4, AM ester#50018可用于通過熒光顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)或熒光酶標(biāo)儀檢測細(xì)胞內(nèi)游離鈣。

基于 BAPTA 的離子指示劑（如 Fluo-4）已被EDC/EDAC（目錄號 59002）原位固定。指示染料的固定可用于下游免疫熒光和 IHC 研究 ( Cell Calcium 1997, 21(3), 175 )。

由于指示劑不與細(xì)胞成分共價(jià)結(jié)合，因此它可以通過有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白主動(dòng)從細(xì)胞中流出。流出速率隨溫度增加，并且可能因細(xì)胞類型而異，導(dǎo)致保留時(shí)間從幾分鐘到幾小時(shí)不等。在細(xì)胞中使用指示劑的實(shí)驗(yàn)通常在加載后一到兩個(gè)小時(shí)內(nèi)進(jìn)行，但如果需要，可以重新加載具有指示劑的細(xì)胞。有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抑制劑丙-磺-舒 (#50027)可用于減緩指示劑從細(xì)胞中流出的速度。

Fluo-4, AM ester相關(guān)參數(shù)：

可溶于DMSO的橙紅色固體

-20°C 儲存并避光，尤其是在溶液中時(shí)

λ Ex /λ Em（含 Ca 2+）：494/506 nm（水解后）

緩沖液中 Ca 2+的K d：~335 nM（水解后）

C 51 H 50 F 2 N 2 O 23

分子量：1096.95

[273221-67-3]

Fluo-4, AM ester屬性：

細(xì)胞滲透性：透膜劑

激發(fā)/發(fā)射：494/516 nm（水解后）

指標(biāo)類型 ：非比例

CAS號：273221-67-3