核酸純化在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)廣泛應(yīng)用。怎樣獲得高質(zhì)量、高純度的DNA或RNA樣品對下游實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行至關(guān)重要，因此，對純化后的核酸進(jìn)行鑒定也是不可少的步驟。本文簡單的回顧學(xué)習(xí)一下核酸鑒定的方法。

核酸鑒定包括：濃度/純度鑒定+完整性鑒定
1.濃度/純度鑒定
（1）紫外分光光度計：
原理：由于核酸中的堿基都具有共軛雙鍵，所以具有紫外光吸收性質(zhì)。核酸在紫外光譜區(qū)有一條典型的吸收曲線，其吸收高峰在260nm處，吸收低谷在230nm處。蛋白質(zhì)在紫外區(qū)的吸收高峰在280nm處，所以核酸的紫外吸收光譜數(shù)據(jù)是鑒定核酸的重要依據(jù)之一。
由于核苷酸最大吸收波長為260nm,根據(jù)朗伯-比爾定律可計算出在波長260nm的紫外線下，1個OD值的光密度大約相當(dāng)于50?g/ml的雙鏈DNA， 40?g/ml的單鏈RNA。紫外分光光度法只適用于測定濃度大于0.25?g/ml的核酸溶液。

計算公式:
dsDNA（?g/?l）=OD260x50x稀釋倍數(shù)/1000
RNA（?g/?l）=OD260x40x稀釋倍數(shù)/1000
純凈的DNA OD260/OD280=1.8，制備的樣品DNA比值在1.7-1.9，若洗脫時不使用洗脫緩沖液而使用去離子水，比值會偏低，因?yàn)镻H值和離子存在會影響光的吸收值。
當(dāng)OD260/OD280< 1.7，表明蛋白質(zhì)含量較高，可用利用酚、氯仿、異戊醇抽提，再用乙醇沉淀去除。
當(dāng)OD260/OD280> 2.0，表明RNA含量較高。可用RNaseA消化后再進(jìn)行純化。
OD260/OD230的值，一般不小于2.0，若小于2.0，表明有碳水化合物、鹽類或有機(jī)試劑污染。

（2）熒光光度法：
熒光光度法以核酸染料溴化乙錠EB嵌入堿基平面后，使本身無熒光的核酸在紫外線激發(fā)下發(fā)出橙色熒光，且熒光強(qiáng)度積分與核酸含量成正比。該方法靈敏度可達(dá)到1-5ng，適合低濃度核酸溶液的定量分析。另外，SYBR Gold作為一種新的超靈敏的熒光燃料，可以從瓊脂糖凝膠中檢測出低于20pg的雙鏈DNA。
用溴化乙錠等熒光染料示蹤的核酸電泳結(jié)果可判定核酸的純度。由于DNA分子較RNA大許多，電泳遷移率低；RNA中rRNA最多，占80-85%,tRNA及核內(nèi)小分子RNA占15%-20%，mRNA占1%-5%。RNA電泳后可呈現(xiàn)特征性的三條帶。在原核生物為明顯可見23S、16S的rRNA條帶及由5S的rRNA與tRNA組成的條帶。真核生物為28S 、18S 的rRNA及由5S、 5.8S的rRNA和tRNA組成的條帶。mRNA因量少且分子大小不一，一般是看不到的。通過電泳分析我們可以鑒定在RNA制品中有無DNA污染，亦可鑒定在DNA制品中有無RNA污染。

2.完整性檢測
常規(guī)使用瓊脂糖凝膠電泳法，基因組DNA的分子量很大，在電場中泳動很慢，如果有降解的小分子DNA片段，在電泳圖上可以顯著的表現(xiàn)出來。
完整的無降解或者降解很少的RNA電泳圖，除具有特征性的三條帶外，一般28S (或23S)RNA的熒光強(qiáng)度約為18S（或16S）RNA的2倍，否則提示有RNA的降解。
RNA樣本電泳可能出現(xiàn)明顯的三條以上的條帶，請不用擔(dān)心，因?yàn)榧?xì)胞中有些細(xì)胞器也含有RNA，如線粒體、葉綠體。如果電泳上樣孔附近有著色條帶，則說明有DNA污染。
必要時，還可以通過一些特殊的實(shí)驗(yàn)分析RNA的完整性，如小規(guī)模的第一鏈cDNA合成反應(yīng)。