淀粉分支酶（SBE）檢測(cè)試劑盒微量法活性說(shuō)明書

測(cè)定意義：

SBE（EC 2.4.1.18）主要存在于植物中，是參與支鏈淀粉合成的關(guān)鍵酶，測(cè)定 SBE 活性在淀粉生物合成、優(yōu)質(zhì)農(nóng)作物品種選育和品質(zhì)遺傳改良研究中具有重要意義。

測(cè)定原理：

直鏈淀粉和碘結(jié)合后在 660nm 有特征光吸收，SBE 使直鏈淀粉含量減少，從而降低了淀粉

-碘復(fù)合物在 660nm 吸收值，一定時(shí)間內(nèi)吸光度下降的百分率可以反映 SBE 活性。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：

可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰、蒸餾水

試劑的組成和配制：

提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存； 試劑一：液體 10mL×1 瓶，4℃保存；

試劑二：粉劑×1 支，4℃保存；臨用前每支加入 1mL 蒸餾水，95℃沸水浴充分溶解后備用；用不完的試劑 4℃保存；

試劑三：液體 13mL×1 瓶，4℃保存； 試劑四：液體 1mL×支，4℃避光保存；

淀粉分支酶（SBE）檢測(cè)試劑盒粗酶液提取：

按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。15000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

測(cè)定步驟：

1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 660 nm，蒸餾水調(diào)零。

2、加樣表

淀粉分支酶（SBE）檢測(cè)試劑盒混勻，37℃準(zhǔn)確保溫 20 min，置 95℃水浴中 5 min（蓋緊，防止水分散失），冷卻

混勻，室溫靜置 10min，取 200uL 至微量石英比色皿或 96 孔板中，660nm 處讀取各管吸光值。每個(gè)測(cè)定管需設(shè)個(gè)一個(gè)對(duì)照管。

注意：

1、可以在不同對(duì)照管中加入不同樣品的粗酶液，然后集中進(jìn)行 5min 95℃沸水浴處理。

2、試劑二如有沉淀，務(wù)必沸水浴溶解后使用。

SBE 活力單位的計(jì)算：

1、按照蛋白濃度計(jì)算

單位的定義：以波長(zhǎng) 660nm 的吸光度下降百分率表示，每 mg 蛋白在反應(yīng)體系中每降低 1％碘藍(lán)值為一個(gè)酶活性單位。

SBE 活性(U/mg prot)=( A 對(duì)照管-A 測(cè)定管)/A 對(duì)照管÷Cpr ×100 2、按照樣本鮮重計(jì)算

單位的定義：以波長(zhǎng) 660nm 的吸光度下降百分率表示，每g 組織在反應(yīng)體系中每降低 1％碘藍(lán)值為一個(gè)酶活性單位。

淀粉分支酶（SBE）檢測(cè)試劑盒SBE 活性(U/g 鮮重)=(A 對(duì)照管-A 測(cè)定管)/A 對(duì)照管÷(W÷V 樣總)×100

V 樣總：提取液總體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣品質(zhì)量，g。