ELISA試驗(yàn)結(jié)果常見(jiàn)問(wèn)題：
一、ELISA試驗(yàn)出現(xiàn)非常弱的結(jié)果，常見(jiàn)有7種原因，其解決方法如下：
1)可能原因：溫育的時(shí)間或者溫度不夠;
解決方法：校正溫育箱溫度。
2)可能原因：顯色反應(yīng)時(shí)間太短;
解決方法：校正定時(shí)鐘準(zhǔn)確定時(shí)。
3)可能原因：所用配制緩沖液的蒸餾水有問(wèn)題;
解決方法：使用新鮮合格的蒸餾水。
4)可能原因：加入抗體/酶的稀釋液濃度太低;
解決方法：按照說(shuō)明書(shū)保存試劑盒和準(zhǔn)確配制工作液。校正移液器，吸嘴要配套，裝吸嘴時(shí)要緊密。
5)可能原因：酶標(biāo)儀濾光片不正確;
解決方法：檢查酶標(biāo)儀使用的濾光片。
6)可能原因：試劑盒沒(méi)有充分平衡;
解決方法：試劑室溫平衡至少20分鐘，確保所有試劑已平衡至室溫。
7)可能原因：不正確的試劑儲(chǔ)存方式;
解決方法：按照說(shuō)明書(shū)要求保存試劑盒。
二、 試驗(yàn)結(jié)果白板，而且陽(yáng)性對(duì)照不顯色，應(yīng)如何分析和查找原因?
試驗(yàn)結(jié)果白板，而且陽(yáng)性對(duì)照不顯色，常見(jiàn)原因如下：
a)可能原因：漏加或者誤加試劑;
解決方法：檢查試驗(yàn)記錄和剩余試劑。每次加液前均應(yīng)核對(duì)標(biāo)簽。
b)可能原因：試劑過(guò)期;
解決方法：使用有效期內(nèi)的產(chǎn)品。
c)可能原因：洗板液配制中出現(xiàn)問(wèn)題，如量筒不干凈含HRP酶抑制物(疊氮鈉
等);
解決方法：使用干凈的器皿，正確配制試劑。
d)可能原因：溫育的時(shí)間或溫度不夠;
解決方法：校正溫育箱溫度。
e)可能原因：標(biāo)準(zhǔn)品失活或者丟失;
解決方法：標(biāo)準(zhǔn)品正確保存、溶解和混勻。
f)可能原因：抗體失活或者丟失;
解決方法：更換抗體或者提高抗體濃度
g)可能原因：酶失活或者丟失
檢查方法：把工作濃度的酶再稀釋20-100倍，取5uL加入50ul的顯色底物，終止后顯色是否能達(dá)到1.0左右，此為酶的粗略估計(jì)。
解決方法：更換酶或者提高酶的濃度。
h)可能原因：顯色底物失活
檢查方法：加少量的工作濃度的酶，TMB是否很快顯色。
解決辦法：更換顯色底物.
三、試驗(yàn)結(jié)果空白背景高，這是什么原因造成的?
試驗(yàn)結(jié)果空白背景高，常見(jiàn)原因如下：
a)可能原因：洗板不干凈;
解決方法：充分洗滌，*拍干;洗板要防止交叉污染;濃縮洗液準(zhǔn)確配制;吸嘴盡可能一次性使用;加樣或加酶拍板的濾紙應(yīng)棄去不用，不要反復(fù)使用，否則易造成污染。
b)可能原因：顯色液變質(zhì)或者試劑過(guò)期;
解決方法：檢查試劑盒有效期。
c)可能原因：試劑稀釋有誤，如加酶的濃度過(guò)高;
解決方法：請(qǐng)按說(shuō)明書(shū)所示稀釋倍數(shù)配制;
d)可能原因：蒸餾水受酶等污染;
解決方法：使用新鮮蒸餾水;
e)可能原因：試劑混用;
解決方法：不同批號(hào)試劑勿混用。
f)可能原因：培養(yǎng)箱溫度超過(guò)37℃或反應(yīng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。
解決方法：顯色反應(yīng)時(shí)間適當(dāng)縮短。
