原代細(xì)胞純化注意細(xì)節(jié)

時(shí)間：2023/7/10閱讀：113

原代細(xì)胞純化注意細(xì)節(jié)：

1、移棄使用過(guò)的細(xì)胞培養(yǎng)基。

2、使用不包含有鈣鎂的平衡鹽溶ye或EDTA清洗細(xì)胞。在培養(yǎng)瓶背著細(xì)胞的一面加入清洗溶液，通過(guò)轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶1到2分鐘清洗細(xì)胞層，然后去除清洗液。

3、加入yi 酶消化，消化細(xì)胞與細(xì)胞，操作手法，試劑的效價(jià)有密切的關(guān)系，消化時(shí)應(yīng)注意觀察細(xì)胞形態(tài)，如細(xì)胞變得橢圓透亮，并且可以觀察到細(xì)胞與細(xì)胞間的間隙時(shí)，輕拍瓶身可以看見(jiàn)成流沙狀，即可中止消化，消化時(shí)盡量減少對(duì)細(xì)胞的吹打。

4、當(dāng)細(xì)胞wan全分離時(shí)，垂直放置培養(yǎng)瓶，讓細(xì)胞流到培養(yǎng)瓶的底部。在培養(yǎng)瓶中加入wan全培養(yǎng)基中止消化，計(jì)數(shù)并再次培養(yǎng)細(xì)胞。

5、對(duì)于無(wú)血清培養(yǎng)基，加入大豆yi 蛋白酶抑制劑。通常使用1∶1（v∶v）0.25 mg/mlyi 蛋白酶抑制劑到y(tǒng)i 蛋白酶中將抑制yi 蛋白酶活性。

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原代細(xì)胞純化注意細(xì)節(jié)

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