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黃曲霉毒素B單克隆抗體的制備及應用

時間:2018-11-15閱讀:251
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黃曲霉毒素(AFT)隨著世界經濟的發展,人類生活水平的提高,人們在越來越多地關注食品對人的生命安全和身體健康的影響。

在食品的污染因素中,真菌毒素對食品的污染是嚴重的污染之一,而黃曲霉毒素因其對人、畜肝臟的劇烈損害而名列毒性。

黃曲霉毒素(AFT)是一組真菌的次級代謝毒性產物。在天然污染的食品和飼料中以黃曲霉毒素B1(AFB1)為常見,是黃曲霉菌產生毒素中的主要成分,其毒性和致癌性也強,不僅給社會帶來重大的經濟損失,而且嚴重威脅消費者的健康。

世界各國均制定了嚴格的AFT*,且*日益嚴格。我國目前還沒有自主研制、適合現場檢測的AFT檢測試劑盒和免疫親和柱,只有少數國家質量監督部門等機構使用極其昂貴的國外進口產品進行AFT抽樣檢測,根本無法有效地對食品、飼料的各個環節進行監控,造成AFT污染十分嚴重。

為了解決該現狀,迫切需要尋找一種經濟、快捷、準確并且易于普及推廣的AFT檢測方法,進而能夠有效地對食品的、運輸、儲存和銷售進行監控,保障廣大消費者的健康。 本研究采用雜交瘤技術,以黃曲霉毒素B1(AFB1)—牛血清白蛋白(BSA)復合物為免疫原免疫BALB/C小鼠,制備了4株穩定產生抗黃曲霉毒素B1單克隆抗體的雜交瘤細胞株,分別命名為1D4,2A12,3B3,4A12,對其中的2A12細胞株分泌的抗體(以下簡稱2A12單抗)進行了綜合鑒定。

2A12單抗屬IgG1,腹水效價1:5×105,親和常數1.67×1010L/mol。黃曲霉毒素類似物B1,B2,G1,G2,M1與2A12單抗的相對交叉反應率分別為100%,52.5%,28.3%,20.0%,29.1%。表明該細胞株具廣譜性,這一特點有利于作AFT總量的測定。

2A12單抗應用于三種黃曲霉毒素檢測方法:1、免疫吸附法(ELISA):檢測限為0.5ug/kg,檢測范圍0.5~50ug/kg。ELISA是常規檢測方法,通量較高,但不宜野外現場測定。

2、免疫親和層析—熒光光度計法(IAC-SFB):檢測限低于1ug/kg,測量范圍1~300ug/kg。IAC-SFB以免疫親和柱凈化樣品,真菌毒素熒光光度計直接報告測定結果,速度快,操作簡易、安全,且可發展為野外現場測定技術。

3、免疫親和層析—液相色譜法(IAC-HPLC):檢測限低于1ug/kg,測量范圍1~300ug/kg。IAC-HPLC法同樣以免疫親和柱純化(凈化)樣品,液相色譜儀檢測分析。此方法既可對AFT各亞類單獨定量,亦可進行AFT總量測定,常用于確證分析。

以上三種方法的回收率均在70%以上,變異系數1.2%到9.4%之間,符合我國有關的商品檢驗行業標準,*AFT檢測的需要,可實現推廣應用。

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