ELISA兩個無關個體功能正常的淋巴細胞在體外混合培養時，由于HLAⅡ類抗原中D和DP抗原(淋巴細胞鑒定的抗原,SD抗原)不同，可相互刺激對方的T細胞發生增殖，此為雙向混合淋巴細胞培養(twowayMLC);若將其中一方的淋巴細胞先用絲列沒素C(mytomycineC)處理或射線照射使之細胞中DNA失去復制能力，但仍能刺激另一方淋巴細胞發生轉化，稱為單向混合淋巴細胞培養(onewayMLC)。兩個個體間HLA抗原差異程度越大，反應越強烈，可通過細胞數量、形態檢查或３H-TdR摻入率檢測反應細胞的增殖水平。如用經照射的、已知D位點抗原的純合子分型細胞(Homozygoustypingcell,HTC)作為刺激細胞，則可檢測待檢者的D位點抗原型別。若待檢者抗原與標準HLA-D抗原相同，MLC不發生增殖，此為HLA-D抗原陰性分型法。EB病毒轉化的B淋巴母細胞表達高水平的HLAⅡ類抗原，常作為單向混合淋巴細胞培養中的刺激細胞。

(二)　操作步驟
1.　刺激細胞的準備　ELISA常用的刺激細胞有EB病毒轉化的B淋巴母細胞(如N２３細胞株，經過克隆化)、HTC或PBMC。取處于對數生長期的N２３細胞，離心后重懸于新鮮*培養基中，調整細胞數為1～2×10６／ml，移置塑料培養瓶或50ml離心管中，用６０Co照射3000rad。
2.　反應細胞的準備　　分離純化待檢個體的PBMC（方法參見"密度梯度離心法分離PBMC"）。
3.　MLC按2×10６PBMC:1×10５照射的N２３細胞／4ml10％FCSRPMI1640比例在培養瓶中進行MLC，培養瓶保持直立，培養4天內不要晃動，第5天加入1ml新鮮培基。如要測定３-TdR摻入率，一般可在MLC的第5天進行；如要檢測MLC中NK、LAK或特異性殺傷性T淋巴細胞(犆TL)，一般在7～10天左右終止培養，收獲效應細胞。殺傷細胞功能檢測參見"自然傷細胞(NK)和淋巴因子激活的殺傷細胞(LAK)的殺傷功能"，所不同的是在96孔培養板中靶細胞數為5×10３／孔。CTL的靶細胞選用作為刺激細胞的N２３細胞。

(三)　試劑器材
1.　細胞　刺激細胞N23細胞系，反應細胞：外周血單個核細胞。
2.　10％FCS　RPMI1640培養基。
3.　照射源：６０Co、X射線裝置。
4.　細胞培養瓶、培養板、滴管、吸管等。
5.　Co孵箱、超凈臺。

(四)　注意事項
1.　注意無菌操作。