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2023年07月05日 15:04南京信帆生物技術(shù)有限公司點(diǎn)擊量:1073
人白細(xì)胞介素8(IL-8)elisa試劑盒關(guān)于標(biāo)本的采集和保存
1、細(xì)胞來源:il-8主要由單核-巨噬細(xì)胞產(chǎn)生;其他如成纖維細(xì)胞、上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、肝細(xì)胞等亦可在適宜的刺激條件下產(chǎn)生il-8。
il-8的分子量約8kd,主要活性形式為72個氨基酸。il-8的氨基酸順序與許多炎癥因子有較高的同源性,屬于同一個家族;現(xiàn)初步證實il-8家族(亦稱pf4家族)至少有12個成員。il-8可以分成α和β亞群,α亞群的基因位于第4號染色體上,β亞群的基因位于第17號染色體上。il-8的受體也有兩型:一種只能與il-8結(jié)合,而另一種還能結(jié)合其它的趨化因子;中性粒細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞表面均表達(dá)豐富的il-8受體。
2、主要生物學(xué)活性:吸引和激活中性粒細(xì)胞,曾被命名為中性粒細(xì)胞激活肽(naf)、粒細(xì)胞趨化肽(gcp)、中性粒細(xì)胞激活因子(naf)等。中性粒細(xì)胞與il-8接觸后發(fā)生形態(tài)變化,定向游走到反應(yīng)部位并釋放一系列活性產(chǎn)物;這些作用可導(dǎo)致機(jī)體局部的炎癥反應(yīng),達(dá)到殺菌和細(xì)胞損傷的目的。此外il-8對嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞也有一定作用。
標(biāo)本的采集和保存
ELISA試驗所用標(biāo)本主要為血清,也可以用經(jīng)過預(yù)處理的唾液、尿液、糞便等生物材料。患者標(biāo)本可能含有干擾試驗的免疫物質(zhì),導(dǎo)致假陽性或者假陰性的結(jié)果,干擾因素一般可分為兩類,即內(nèi)源性和外源性干擾因素。內(nèi)源性干擾因素包括類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、高濃度的非特異性免疫球蛋白等,避免內(nèi)源性干擾因素主要通過選擇合理的試劑。外源性干擾因素包括標(biāo)本溶血、標(biāo)本被細(xì)菌污染、儲存時間過長及標(biāo)本凝固等。在血液采集和運(yùn)輸過程時,應(yīng)注意避免溶血。否則,紅細(xì)胞溶解時會釋放出血紅蛋白,血紅蛋白中的亞鐵血紅素具有過氧化物酶活性的物質(zhì),在以HRP為標(biāo)記的ELISA試驗測定中,可能會增加非特異性顯色而出現(xiàn)假陽性結(jié)果。血清標(biāo)本適宜在新鮮時檢測,若推遲檢測需將標(biāo)本低溫保存。一般說來,在7天內(nèi)檢測的血清標(biāo)本,可放置于2℃~8℃保存,超過1周檢測的需低溫冰存。因反復(fù)冰融會使抗體效價降低,所以,對需要保存做多次抗體測定的血清標(biāo)本,應(yīng)少量分裝并冰存。血清標(biāo)本應(yīng)充分離心,否則可因殘留的纖維蛋白原非特異吸附于微孔而造成假陽性結(jié)果。
加樣操作中,依次有3次加樣,即加標(biāo)本、加酶結(jié)合物、加底物。加標(biāo)本一般采用手工加樣或者加樣器。手工加樣每次必須更換吸嘴,以避免交叉感染。要掌握好并在實際操作中揣摩使用技巧,避免吸樣量過多或過少。加樣器在長時間使用時會因機(jī)械磨損或推動桿內(nèi)附著的血痂等原因造成加樣不準(zhǔn),因此必須定期對加樣器進(jìn)行維護(hù)和校準(zhǔn)。加酶結(jié)合物和底物一般可直接滴加。每次加樣時,應(yīng)將所加物置于ELISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,注意不可濺出,不能產(chǎn)生氣泡,加酶試劑后要用吸水紙在酶標(biāo)板上輕輕擦拭吸干。加底物操作時應(yīng)注意各試劑盒顯色劑不能混用,添加順序不能顛倒,不能濺出孔外。標(biāo)本較多時,需要分批操作,以免加樣板過多,造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(尤其是在室溫較高時)。最后,在微型振蕩器上震蕩lmin,以保證混勻。
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