磁珠法提取試劑的原理與其成分簡介

2024年07月05日 09:20上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司點(diǎn)擊量：766

磁珠法核酸提取試劑盒原理是通過特殊條件快速裂解樣本，并利用磁珠顆粒特異性吸附核酸，經(jīng)過洗滌和洗脫，達(dá)到快速分離核酸的目的。試劑盒提取效率高，性能穩(wěn)定，提取純化的核酸可用于酶切、反錄、PCR、 RI-PCR、 Southern blot等各種常見下游實驗。

磁珠法核酸提取試劑盒目前主要被用于多種類型的生物樣本中病毒核酸的提取、富集、純化步驟，其處理后的產(chǎn)物用于臨床體外檢測使用。

試劑盒1.jpg

磁珠法提取試劑常見成分

SDS（十二烷基硫酸鈉)——性質(zhì):
1、陰離子表面活性劑：對人體微毒；
2、優(yōu)異的發(fā)泡劑：廣泛用于洗衣粉、牙膏、洗發(fā)水、滅火器；
3、易溶于熱水：當(dāng)水溫高于8℃（≈）時，SDS的溶解度隨水溫升高而急劇升高。當(dāng)水溫升至70℃（≈），溶解度升高不明顯。

SDS（十二烷基硫酸鈉)——作用:
它能斷裂分子內(nèi)和分子間的氫鍵，使分子去折疊，破壞蛋白分子的二、三級結(jié)構(gòu)，使蛋白質(zhì)變性。在高溫下可以破壞蛋白質(zhì)與核酸的結(jié)合，促進(jìn)核酸釋放。

乙基苯基聚乙二醇（Nonidet P 40 ）：
NP-40是一種很溫和的非離子型去垢劑，1%濃度基本可以破壞掉細(xì)胞膜，而對核膜的破壞作用較弱。

弱陽離子螯合樹脂（Chelex-100）：
提取液里面bling，bling的小珠子是一種由苯乙烯、二乙烯苯共聚體組成的化學(xué)螯合樹脂，含有成對的亞氨基二乙酸鹽離子，可螯合多價離子，特別是對高價金屬離子有很高的親和力和螯合作用。在低離子強(qiáng)度、堿性及煮沸的條件下，可以使細(xì)胞膜破裂，并使蛋白質(zhì)變性，通過離心除去Chelex顆粒，使其結(jié)合的物質(zhì)與DNA 分離。

知識點(diǎn)：chelex-100在模板中殘留過多會影響PCR擴(kuò)增

蛋白酶K（Protein K）：
是一種從白色念珠菌分離出來的強(qiáng)力蛋白溶解酶，具有很高的比活性，是DNA提取的關(guān)鍵試劑。DNA提取中，主要作用是酶解與核酸結(jié)合的組蛋白，使DNA游離在溶液中。

聚乙二醇辛基苯基醚（Triton X-100——曲拉通）：
曲拉通X-100是一種非離子表面活性劑，在水中不解離,在溶液中穩(wěn)定性高，不易受強(qiáng)電解質(zhì)無機(jī)鹽類的影響，能與生物膜中的磷脂等脂質(zhì)結(jié)合形成可溶性復(fù)合物；疏水端也能與膜蛋白的疏水區(qū)結(jié)合形成復(fù)合物，溶解于溶液中。

異硫氰酸胍（GITC）：
強(qiáng)用力的蛋白質(zhì)變性劑，能迅速溶解蛋白質(zhì)，導(dǎo)至細(xì)胞結(jié)構(gòu)破碎，核蛋白由于其二級結(jié)構(gòu)的破壞消失而迅速與核酸分離。GITC也是經(jīng)典RNA提取試劑TRIZOL的主要成分。

乙二胺四乙酸（EDTA）：
是一種優(yōu)良的鈣、鎂離子螯合劑。抑制脫氧核糖核酸酶對DNA的降解作用（DNase作用時需要一定的金屬離子作輔基）。

Tris-Hcl：
三羥甲基氨基甲烷(Tris)溶液與鹽酸混勻后形成的緩沖劑，為裂解液及核酸提供一個比較適宜的環(huán)境。

小結(jié)：經(jīng)典的裂解液幾乎都含有去污劑 (如 SDS、Triton X-100、NP-40、Tween 20 等) 和鹽 (如 Tris、EDTA、NaCl 等)。鹽的作用，除了提供一個合適的裂解環(huán)境 (如 Tris)，還包括抑制樣品中的核酸酶在裂解過程中對核酸的破壞 (如 EDTA)、維持核酸結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定 (如 NaCl) 等。

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