操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
中文名稱:Ac-VEID-FMK(caspase 6 抑制劑 )
英文名稱:Caspase 6 Inhibitor Z-VE(OMe)ID(OMe)-FMK
產(chǎn)品規(guī)格:20μl
產(chǎn)品貨號:BJ-01X7017
英文名稱:Caspase 6 Inhibitor Z-VE(OMe)ID(OMe)-FMK 產(chǎn)品規(guī)格:20μl 濃度:5mM in DMSO 分子式:C31H45FN4O10 分子量:652.9 純度:≥95% (TLC) 儲存:-20℃,有效期12個月 |
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1) 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗,1%。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。
二. 細(xì)胞處理:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
細(xì)胞培養(yǎng)方法:
1、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細(xì)胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
Salmonella enterica腸道沙門氏LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周RGS5 G蛋白信號轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)節(jié)因子5抗體 規(guī)格: 0.2mlRabbit Anti-Monkey IgM/Cy3 Cy3標(biāo)記的兔抗猴IgM 規(guī)格: 0.1ml
Aspergillus spp. 曲霉屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 1-2周Phospho-PKM2 (Tyr105) 磷酸化丙酮酸激M2抗體 規(guī)格: 0.1mlphospho-B-Raf (Thr597) 磷酸化B-Raf抗體 規(guī)格: 0.1ml
Fructus hordei germinatus麥芽探針法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周phospho-C-Myc(Thr358) 磷酸化致基因C-Myc抗體 規(guī)格: 0.1mlCripto-1 畸胎瘤衍化生因子抗體(C端) 規(guī)格: 0.1ml
Heterakis gallinarum雞異刺線蟲LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周phospho-PI3 Kinase p110 beta(Ser1070) 磷酸化磷脂酰肌醇激(PI3Kβ)抗體 規(guī)格: 0.1mlREF-1/APEX1 多功能DNA修復(fù)抗體 規(guī)格: 0.1ml
Bonamia exitiosus殺蠣包拉米蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Phospho-PDGFRA(Tyr1018) 磷酸化小板源性生因子受體-α抗體 規(guī)格: 0.1mlphospho-PKC delta (Ser645) 磷酸化蛋白激C亞性D型抗體 規(guī)格: 0.1ml
Porcine Circovirus 2 (PCV-2)豬圓環(huán)病毒2型探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用) 50次 低溫 -20℃ 一年 1-2周GM-CSFR alpha/CD116/CSF2RA 粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子受體α抗體 規(guī)格: 0.2mlVHLH/Von Hippel Lindau 腦視網(wǎng)膜管瘤G7蛋白抗體(逢希伯-林道氏) 規(guī)格: 0.2ml
麝源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒 種源性檢測/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周HACE1 E3泛素蛋白連接HACE1抗體 規(guī)格: 0.2ml
Globicatella sanguinis血球鏈探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周OPN/BSP 骨橋蛋白抗體(分泌型磷蛋白1)人 規(guī)格: 0.1ml
Apiosporina morbosa李黑節(jié)病PCR試劑盒 植物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周CPXCR1 瘤/睪抗原77抗體 規(guī)格: 0.2ml
馬源性成分LAMP試劑盒 種源性檢測/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Delta Catenin δ連環(huán)蛋白/δ連環(huán)素/δ鏈接素抗體(δ-catenin) 規(guī)格: 0.2ml
Ac-VEID-FMK(caspase 6 抑制劑 )人相撲結(jié)合UBC9(UBE2I/UBC9/UBCE9)免疫試劑盒*直銷
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MS培養(yǎng)基(不含瓊脂和蔗糖) 英文名稱: 產(chǎn)品規(guī)格:250g
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