操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
中文名稱(chēng)：Btk抑制劑(PCI-32765)
英文名稱(chēng)：PCI-32765
產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg|500mg
產(chǎn)品貨號(hào)：BJ-01X7078
英文名稱(chēng)：PCI-32765 產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg|500mg PCI-32765是具有選擇性的Btk的不可逆抑制劑，IC50值為0.5nM。 注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！ ：936563-96-1 別名：Ibrutinib 純度：99.87% 分子量：440.5 儲(chǔ)存條件：-20℃避光，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1） 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二． 細(xì)胞處理：
1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
Parainfluenza Virus 3 (PIV-3)副流感病毒3型探針?lè)晒舛縍T-PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Dog IgM/Bio 標(biāo)記的兔抗犬IgM抗體 規(guī)格: 0.1ml
Radix astragali preparata炙黃芪染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周PKN2 蛋白激N2抗體 規(guī)格: 0.1ml
貉源性成分LAMP試劑盒 種源性檢測(cè)/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周BTNL2 嗜脂蛋白樣2抗體 規(guī)格: 0.2ml
Sabia Virus(SABV)薩比亞病毒探針?lè)晒舛縍T-PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周phospho-MEK3(Thr222) 磷酸化絲裂原活化蛋白激激3抗體 規(guī)格: 0.1ml
potato Virus S(PVS)馬鈴薯病毒S核酸型檢測(cè)試劑盒 植物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Repetin 中間絲相關(guān)蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
Radix gentianae龍膽PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周Bestrophin 2 卵黃狀黃斑蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2ml
Sarcocystis neurona神經(jīng)肉孢子蟲(chóng)LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周JNK2 氨基末端激2抗體 規(guī)格: 0.2ml
Streptococcus pneumoniae肺炎鏈球探針?lè)晒舛縋CR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周phospho-MEK1/MAP2K1(Ser385) 磷酸化絲裂原活化蛋白激1抗體 規(guī)格: 0.1ml
Radix polygoni multiflori preparata制何首烏染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周GLI1/Zfp5 腦膠質(zhì)瘤相關(guān)蛋白抗體（鋅指蛋白5） 0.1ml
Razdan病毒RT-LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Phospho-ATRIP (Ser224) 系統(tǒng)性紅斑狼瘡先關(guān)蛋白TREX1抗體 規(guī)格: 0.1ml
Btk抑制劑(PCI-32765)魚(yú)過(guò)氧化氫(CAT)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
人糜蛋白免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
脫氧膽鹽檸檬酸鹽瓊脂培養(yǎng)基 英文名稱(chēng)：Deoxycholate Citrate Agar Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g
人結(jié)核菌桿抗體IgG(TB-Ab IgG)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
阿奇檢定培養(yǎng)基 英文名稱(chēng)：Azithromycin Test Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g
人乙酰轉(zhuǎn)移(ChAT)免疫試劑盒*直銷(xiāo)
HBI副溶血性弧菌生化鑒定條（新國(guó)標(biāo)） 英文名稱(chēng)： 產(chǎn)品規(guī)格：5條/盒
人GTPNRas(NRAS)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
豬腸脂肪酸結(jié)合蛋白(iFABP)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
牛血小板活化因子乙酰水解(PLA2G7)免疫試劑盒*直銷(xiāo)
小鼠內(nèi)分泌腺來(lái)源的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(EG-VEGF)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
