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RIPA裂解液處理的原理

2016年05月20日 11:23上海邦景實業有限公司點擊量:3125

ELISA試劑盒RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)對動物細胞胞膜、胞漿、胞核成分均有較強裂解作用,RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規的Western、IP等。
RIPA裂解液的原理如下:
RIPA主要是從動物組織和動物細胞中抽取的可溶性蛋白。RIPA 組織/細胞裂解液是利用表面活性劑等來裂解細胞膜(包括核膜)。
索萊寶RIPA裂解液的使用方法
如發現RIPA有沉淀,請放室溫半小時或者常溫水浴使沉淀溶解。
根據使用量,取每1ml RIPA 加入10ul PMSF,使PMSF的zui終濃度為1mM。混勻備用 (PMSF現用現加)。 
1、樣品前處理: 
a)對于貼壁細胞:去除培養液,用 PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍。按照 6 孔板每孔細胞量加入150-250 ul裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下,使裂解液和細胞充分接觸。
b)對于懸浮細胞:離心收集細胞,用手指把細胞用力彈散。按照 6 孔板每孔細胞量加入 150-250 ul 裂解液的比例加入裂解液,再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多,必需分裝成50-100萬細胞/管,然后再裂解。
c)對于組織樣品: 把*切成細小的碎片。按照每20mg組織加入150-250 ul裂解液的比例加入裂解液。 (如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當減少裂解液的用量)。用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。
2、后處理:
將裂解后的樣品10000-14000g離心3-5分鐘,取上清,即可進行后續的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
注意事項 :
強烈型裂解液,可以提取核蛋白,但在提取核蛋白的同時,也會將基因組一并釋放出來,造成細胞裂解液粘稠,此時可以直接加入蛋白上樣緩沖液,煮沸再離心,離心后直接上樣電泳;若想測定濃度,可入加少量 SDS(1%),煮沸后離心測濃度。本系列蛋白提取試劑所提取的白由于含有去污劑,所以不適合使用Bradford蛋白濃度測定試劑盒,請選擇BCA法或者Lowry法檢測蛋白濃度。

Contactin 3    腦源性免疫球蛋白超家族蛋白3抗體
Carboxypeptidase B1    胰羧肽酶B1抗體
CRABP2    細胞維甲酸結合蛋白2抗體
C2orf80    2號染色體開放閱讀框80抗體
phospho-CD32B(Tyr291)    磷酸化CD32B抗體
Complement C3    過敏毒素C3(補體C3)抗體
CD66c    癌胚抗原相關細胞粘附分子抗體
CPEB1    細胞質多聚腺苷酸結合蛋白1抗體
CST7    半*蛋白酶抑制劑7抗體
C22orf29    22號染色體開放閱讀框29抗體
Contactin-1    神經細胞表面蛋白F3
Cathepsin C/DPP1    組織蛋白酶C抗體
Caspase 4    半胱胺酸蛋白酶蛋白-4抗體

ELISA試劑盒

 

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