原代細(xì)胞實驗中過失的方法

2017年11月01日 10:03上海邦景實業(yè)有限公司點擊量：226

原代細(xì)胞實驗中過失的方法：
1、檢驗技師應(yīng)具備從事實驗室操作的基本素質(zhì)和實踐經(jīng)驗。
2、操作前仔細(xì)閱讀說明書，嚴(yán)格按照說明書要求進(jìn)行規(guī)范化操作。
3、評估試劑盒的實用性，試劑盒的穩(wěn)定與否，對準(zhǔn)確率的高低很重要。
4、加樣要準(zhǔn)確、快速。
5、使用校對過的微量移液器，排除自然誤差。
6、嚴(yán)格掌握顯色時間，顯色時間過短，加入終止液反應(yīng)終止后，底物結(jié)合物的量過少，易出現(xiàn)假陰性。
7、洗滌*，洗板不*，酶結(jié)合物本底顯色會呈現(xiàn)假陽性。
8、嚴(yán)控反應(yīng)時間，反應(yīng)時間過長，酶失活，反應(yīng)時間過短，酶結(jié)合物不能與血清中的微生物抗原抗體充分結(jié)合，生成物結(jié)構(gòu)松散不牢固，容易洗掉，都可能造成假陰性。
實驗過程必知小知識：
① 建議所有的標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和空白對照都做雙份檢測，取平均值，以減小實驗誤差。
② 若顯色過淺，可適當(dāng)延長底物溫育時。
③ 實驗嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，實驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
④ 酶標(biāo)包被板開封后如未用完，應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存。
⑤ 標(biāo)本宜在新鮮時檢測，如有細(xì)菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP，也會產(chǎn)生假陽性反應(yīng)，保存過久可發(fā)生聚合在ELISA中可使本底加深。
⑥ 凍結(jié)標(biāo)本溶解后，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混勻宜輕緩，避免氣泡，可上下顛混合，不要在混勻器上強烈震蕩。
⑦ 渾濁或有沉淀的標(biāo)本應(yīng)先離心或過濾，澄清后再檢測。
⑧ 反復(fù)凍融會使蛋白效價降低，所以代測樣本如需保存作多次檢測，宜少量分裝冰存。
原代細(xì)胞HK tRNA   人角膜細(xì)胞總RNA   10 µg
HRPEpiC tRNA   人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞總RNA   10 µg
HLEpiC tRNA   人晶狀體上皮細(xì)胞總RNA   10 µg
HIPEpiC tRNA   人虹膜色素上皮細(xì)胞總RNA   10 µg
HConF tRNA   人結(jié)膜成纖維細(xì)胞總RNA   10 µg
HNPCEpiC tRNA   人無色素睫狀上皮細(xì)胞總RNA   10 µg
HTMC tRNA   人小梁網(wǎng)細(xì)胞總RNA   10 µg
HAmEpiC tRNA   人羊膜上皮細(xì)胞總RNA   10 µg
HVT tRNA   人滋養(yǎng)層絨毛細(xì)胞總RNA   10 µg
HVMF tRNA   人絨毛間葉成纖維細(xì)胞總RNA   10 µg
HPA-v tRNA   人前脂肪細(xì)胞-內(nèi)臟總RNA   10 µg
HPA-s tRNA   人前脂肪細(xì)胞-皮下總RNA   10 µg
HMSC-bm tRNA   人間充質(zhì)干細(xì)胞-骨髓總RNA   10 µg
HMSC-ad tRNA   人間充質(zhì)干細(xì)胞-脂肪總RNA   10 µg
HMSC-hp tRNA   人間充質(zhì)干細(xì)胞-肝臟總RNA   10 µg
HUMSC tRNA   人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞總RNA   10 µg
HPMSC tRNA   人肺間充質(zhì)干細(xì)胞總RNA   10 µg
HMEpiC tRNA   人上皮細(xì)胞總RNA   10 µg
HMF tRNA   人成纖維細(xì)胞總RNA   10 µg
HUVEC tRNA   人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞總RNA   10 µg
HUAEC tRNA   人臍動脈內(nèi)皮細(xì)胞總RNA   10 µg
HUVSMC tRNA   人臍靜脈平滑肌細(xì)胞總RNA   10 µg
HUASMC tRNA   人臍動脈平滑肌細(xì)胞總RNA   10 µg
HBMEC miRNA   人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞微小RNA   1 µg
HBCSMC miRNA   人腦血管平滑肌細(xì)胞微小RNA   1 µg
HBVP miRNA   人腦血管周細(xì)胞微小RNA   1 µg原代細(xì)胞

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