細(xì)胞傳代步驟：
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
兔氣管平滑肌分離自氣管組織；氣管（Trachea），呼吸器官的一部分；為后壁略平的圓筒型管狀。上端平第六頸椎下緣，與環(huán)狀軟骨相連；向下至第四、五胸椎體（相當(dāng)胸骨角平面）交界處，分左、右主支氣管，分叉處稱為氣管杈。氣管主要由14-16個(gè)半環(huán)狀軟骨構(gòu)成，有彈性，軟骨為“C”字形的軟骨環(huán)，缺口向后，各軟骨環(huán)以韌帶連接起來(lái)，環(huán)后方缺口處由平滑肌和致密結(jié)締組織連接，保持了持續(xù)張開(kāi)狀態(tài)。管腔襯以粘膜，表面覆蓋纖毛上皮，粘膜分泌的粘液可粘附吸入空氣中的灰塵顆粒，纖毛不斷向咽部擺動(dòng)將粘液與灰塵排出，以凈化吸入的氣體。氣管平滑肌是氣管的重要結(jié)構(gòu)組成之一，在機(jī)體的正常生理過(guò)程中發(fā)揮著重要作用；能夠保持氣道張力，維持氣道管狀形態(tài)，從而有利于氣體流通，保持肺部通氣。氣管平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見(jiàn)細(xì)胞貼壁伸展，細(xì)胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細(xì)胞匯合，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長(zhǎng)梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長(zhǎng)，高低起伏；細(xì)胞密度低時(shí)，常交織成網(wǎng)狀；密度高時(shí)，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長(zhǎng)較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長(zhǎng)特點(diǎn)。氣管平滑肌細(xì)胞的異常是呼吸道疾病的重要病理特征之一，其增生、肥大是氣道重塑的關(guān)鍵。
方法簡(jiǎn)介：
公司實(shí)驗(yàn)室分離的兔氣管平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合組織貼塊法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)：
公司實(shí)驗(yàn)室分離的兔氣管平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | |
組織來(lái)源 | 氣管 | 產(chǎn)品貨號(hào) | YS-01X7092 |
生長(zhǎng)特性 | 貼壁 | 細(xì)胞形態(tài) | 成纖維細(xì)胞樣 |
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細(xì)胞復(fù)蘇步驟:
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
公司正在出售的產(chǎn)品：
大鼠重肽神經(jīng)絲蛋白(NEFH)試劑盒 ，英文名： NEFH ELISA Kit
Mouse perinuclear ai neuophil cytoplasmic aibody (pANCA) ELISA Kit 小鼠抗中性粒細(xì)胞核周抗體(pANCA)試劑盒
MouseBonemorphogeneticproteieceptorⅡ,BMPR-ⅡELISAKit 小鼠骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPR-Ⅱ)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
CLIAKitforHumanInsulieceptorBeta,ISR-BetaELISAKIT人胰島素受體β
微型RNA(miRNA)擴(kuò)增試劑盒20次
ELISAKitMIP-3β大鼠巨噬細(xì)胞性蛋白3β
小鼠甲狀旁腺激素(PTH)試劑盒 96T/48T
小鼠甲種胎兒球蛋白/甲胎蛋白(AFP)試劑盒 96T/48T
小鼠甲基化酶(Methylase)試劑盒 96T/48T
小鼠己糖激酶(HK)試劑盒 96T/48T
環(huán)指蛋白156抗體
小鼠粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)ELISA 試劑盒 96T/48T
Human prostatic acid phosphatase (PAP) ELISA Kit 人前列腺酸性0酸酶(PAP)試劑盒
HumanleukocyteaigenG,HLA-GELISAKit 人類白細(xì)胞抗原G(HLA-G)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
Humanadrenalcoexaibody,ACA試劑盒人腎上腺皮質(zhì)抗體(ACA)試劑盒規(guī)格：96T/48T
植物a-(a-AMYLASE)活性比色法定量試劑盒20次
Mouseadrenergicalpha-1Areceptor,ADRA1AELISAKit小鼠能a1A受體(ADRA1A)試劑盒規(guī)格：96T/48T
吞噬細(xì)胞運(yùn)動(dòng)蛋白2抗體
THY1重組食蟹猴 CD90 / THY-1 蛋白 Protein
IQGAP1 支架蛋白抗原 0.5mgIQGAP1 支架蛋白抗原
DDOST重組人 DDOST / OST48 蛋白 Protein
DCBLD1 Protein Human 重組人 Discoidin / DCBLD1 蛋白
PDPN Protein Mouse 重組小鼠 Podoplanin / PDPN 蛋白
兔氣管平滑肌細(xì)胞IQGAP1 支架蛋白抗原 0.5mgIQGAP1 支架蛋白抗原
DCBLD1 Protein Human 重組人 Discoidin / DCBLD1 蛋白
THY1重組食蟹猴 CD90 / THY-1 蛋白 Protein
PDPN Protein Mouse 重組小鼠 Podoplanin / PDPN 蛋白
DDOST重組人 DDOST / OST48 蛋白 Protein
細(xì)胞凍存步驟:
待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例；
1．細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。
3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
