【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

1.產品名稱：小鼠肺動脈成纖維細胞操作步驟

2.組織來源：肺動脈組織

3.產品規格：5×10^5cells/T25細胞培養瓶

4.細胞簡介：

小鼠肺動脈成纖維細胞分離自肺動脈組織；肺動脈亦稱肺動脈干。在呼吸空氣的脊椎動物中，把靜脈血由心臟導向肺臟的動脈。肺大動脈起于右心室，在主動脈之前向左上后方斜行，在主動脈弓下方分為左、右肺動脈，經肺門入肺。肺動脈干位于心包內，為一粗短的動脈干。起自右心室，在升主動脈前方向左后上方斜行，至主動脈弓下方分為左、右肺動脈。左肺動脈較短，在左主支氣管前方橫行，分二支進入左肺上、下葉。右肺動脈較長而粗，經升主動脈和上腔靜脈后方向右橫行，至右肺門處分為三支進入右肺上、中、下葉。成纖維細胞（Fibroblast）是疏松結締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質細胞分化而來；成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構，其細胞核呈規則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質嗜弱堿性，具明顯的蛋白質合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現跟纖維細胞的互相轉化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的肺動脈成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現為小的突起；6h后細胞基本貼壁*，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。肺動脈成纖維細胞在生理條件下的主要功能包括：構造和維持肺動脈的正常形態；合成和釋放細胞外基質；組織損傷后及時大量聚集修復損傷組織。

本公司的小鼠肺動脈成纖維細胞采用*-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10^5cells/瓶；細胞經Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

5.培養基信息：

DMEM[H]、FBS、成纖維細胞生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

冷凍保存方法一：冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽*儲存。
冷凍保存方法二：冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期儲存。-20℃不可超過1小時，以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，也可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
操作步驟：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1、準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優質胎牛血清，10%。
2、培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養基，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
二、細胞處理：
1、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
優勢：
1、細胞株種類齊全，包括腫瘤細胞、正常細胞、耐藥細胞株，如：人滑膜細胞，人胃癌細胞，人細胞，人腎近曲小管上皮細胞，肝癌細胞，心肌細胞，子宮內膜細胞等
2、*，專業的細胞培養技術指導
3、購買本公司的細胞株，免費復蘇
4、客戶收到細胞后一天回傳細胞圖片，三天回傳細胞生長狀態圖片，五天內有問題公司負責重發，超過五天時限至一個月內重發細胞收半價，超過一個月重發全額收費。
5、經濟、實惠、可靠，完善、穩定的實驗體系，優秀的科研隊伍，*的實驗設備、準確可靠的實驗結果，是您可靠的合作伙伴
6、此外，我們還可以提供Elisa試劑盒、細胞株、抗體、血清、培養基、常用生化試劑、耗材。
Y17104 Rattus norvegicus (Rat)
促腎上腺皮質激素(ACTH)檢測試劑盒(化學發光免疫分析法) CLIA Kit for Adrenocorticotropic Hormone (ACTH) 96T Y17105 Homo sapiens (Human)
促腎上腺皮質激素(ACTH)檢測試劑盒(化學發光免疫分析法) CLIA Kit for Adrenocorticotropic Hormone (ACTH) 96T Y17106 Mus musculus (Mouse)
促腎上腺皮質激素(ACTH)檢測試劑盒(化學發光免疫分析法) CLIA Kit for Adrenocorticotropic Hormone (ACTH) 96T Y17107 Rattus norvegicus (Rat)
催乳素(PRL)檢測試劑盒(化學發光免疫分析法) CLIA Kit for Prolactin (PRL) 96T Y17108 Homo sapiens (Human)
抵抗素(RETN)檢測試劑盒(化學發光免疫分析法) CLIA Kit for Resistin (RETN) 96T Y17109 Mus musculus (Mouse)
多巴胺(DA)檢測試劑盒(化學發光免疫分析法) CLIA Kit for Dopamine (DA) 96T Y17110 General
核因子κB受體激活因子配基(RANκL)檢測試劑盒(化學發光免疫分析法) CLIA Kit for Receptor Activator Of Nuclear Factor Kappa B Ligand (RANkL) 96T Y17111 Homo sapiens (Human)
Apelin 12蛋白(AP12)檢測試劑盒(化學發光免疫分析法) CLIA Kit for Apelin 12 (AP12) 96T Y17112 Homo sapiens (Human)
Apelin 12蛋白(AP12)檢測試劑盒(化學發光免疫分析法) CLIA Kit for Apelin 12 (AP12) 96T Y17113 Mus musculus (Mouse)
降鈣素基因相關肽(CGRP)檢測試劑盒(化學發光免疫分析法) CLIA Kit for Calcitonin Gene Related Peptide (CGRP) 96T Y17114 Homo sapiens (Human)
降鈣素基因相關肽(CGRP)檢測試劑盒(化學發光免疫分析法) CLIA Kit for Calcitonin Gene Related Peptide (CGRP) 96T Y17115 Mus musculus
Anti-IL-12/FITC  熒光素標記抗白介素12抗體(人)IgG   0.2ml
Anti-IL-12R Beta1/CD212/FITC  熒光素標記白細胞介素-12受體β1抗體IgG   0.2ml
Anti-IL-12R Beta2/FITC  熒光素標記白細胞介素-12受體β2抗體IgG   0.2ml
Anti-IL-13/FITC   熒光素標記白介素13抗體IgG   0.2ml
Anti-IL-13Ra1/FITC  熒光素標記白細胞介素-13受體a1抗體IgG   0.2ml
Anti-IL-13Ra2/FITC  熒光素標記白細胞介素-13受體a2抗體IgG   0.2ml
Anti-IL-14/Taxilin alpha/FITC  熒光素標記抗白介素14抗體IgG   0.2ml
Anti-IL-15/FITC  熒光素標記白介素15抗體IgG   0.2ml
Anti-IL-15R Alpha/FITC  熒光素標記白介素15受體α抗體IgG   0.2ml
Anti-IL-16/FITC   熒光素標記白細胞介素-16抗體IgG   0.2ml
Anti-IL-16/FITC  熒光素標記白介素16抗體IgG   0.2ml
Anti-IL-17/FITC  熒光素FITC標記白介素-17抗體IgG   0.2ml
Anti-IL-17B/FITC  熒光素標記白介素-17B抗體IgG   0.2ml
Anti-IL-17/PE  熒光素PE標記白介素-17抗體IgG   0.2ml
Anti-IL-17R/IL-17RA/CD217/FITC  熒光素標記白介素17受體抗體IgG   0.2ml
Anti-IL-17(Interleukin-17)human/FITC  熒光素標記白介素-17抗體（人）IgG   0.2ml
Anti-IL-17RC/IL-17RL/FITC  熒光素標記白介素17受體C抗體IgG   0.2ml
Anti-IL-17RD/FITC  熒光素標記白介素17受體D抗體IgG   0.2ml
Anti-IL-17RB/FITC  熒光素標記白介素-17B受體抗體IgG   0.2ml
Anti-IL-17C/FITC  熒光素標記白介素-17C抗體IgG