【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

1.產品名稱：兔角膜內皮細胞操作步驟

2.組織來源：眼角膜組織

3.產品規格：5×10^5cells/T25細胞培養瓶

4.細胞簡介：

兔角膜內皮細胞分離自眼角膜組織；角膜位于眼球前壁的一層透明膜，約占纖維膜的前1/6，從后面看角膜呈正圓形，從前面看為橫橢圓形。角膜厚度各部分不盡相同，*部zui薄。角膜有十分敏感的神經末梢，如有外物接觸角膜，眼瞼便會不由自主地合上以保護眼睛。為了保持透明，角膜并沒有血管，透過外界空氣、淚液及房水獲取養份及氧氣。角膜分為五層，由前向后依次為：上皮細胞層、前彈力層、基質層、后彈力層、內皮細胞層。角膜的高度透明性和光學性是正常發揮生理功能的必要條件之一，而角膜內皮細胞(CEC)在維持角膜的正常生理功能方面起重要作用。角膜內皮細胞是角膜內層的單層細胞，構成了后彈力層和房水之間的物理屏障，通過離子“泵”功能調節角膜中離子濃度和水分，維持角膜的半脫水狀態，保證角膜的正常厚度和透明度。一旦角膜內皮細胞功能出現紊亂，常導致角膜水腫而使角膜部分甚至*失去透明性。角膜內皮細胞主要功能有：①角膜是*的無血管的組織，具有透明的特性和合成許多蛋白的功能；②角膜內皮細胞對角膜透明性有重要作用；③角膜內皮細胞通過Na+-K+-ATP酶活性，維持角膜和房水內Na+梯度，防止水分滲入角膜內，維持角膜實質層相對脫水狀態，維持透明性。

本公司的兔角膜內皮細胞采用混合膠原酶消化結合內皮細胞培養基培養篩選制備而來，細胞總量約為5×10^5cells/瓶；細胞經NSE免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

5.培養基信息：

M199、FBS、內皮細胞生長添加劑、Heparin、Ascorbic Acid、Hydrocortisone、Penicillin、Streptomycin等

冷凍保存方法一：冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽*儲存。
冷凍保存方法二：冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期儲存。-20℃不可超過1小時，以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，也可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
操作步驟：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1、準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優質胎牛血清，10%。
2、培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養基，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
二、細胞處理：
1、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
優勢：
1、細胞株種類齊全，包括腫瘤細胞、正常細胞、耐藥細胞株，如：人滑膜細胞，人胃癌細胞，人細胞，人腎近曲小管上皮細胞，肝癌細胞，心肌細胞，子宮內膜細胞等
2、*，專業的細胞培養技術指導
3、購買本公司的細胞株，免費復蘇
4、客戶收到細胞后一天回傳細胞圖片，三天回傳細胞生長狀態圖片，五天內有問題公司負責重發，超過五天時限至一個月內重發細胞收半價，超過一個月重發全額收費。
5、經濟、實惠、可靠，完善、穩定的實驗體系，優秀的科研隊伍，*的實驗設備、準確可靠的實驗結果，是您可靠的合作伙伴
6、此外，我們還可以提供Elisa試劑盒、細胞株、抗體、血清、培養基、常用生化試劑、耗材。
myelin protein 2)
PE-Cy3標記的兔抗人IgM MYSM1(Myb-like, SWIRM and MPN domain-containing protein 1)
PE-CY5標記的兔抗人IgM MYOZ/MYOZ1(Myozenin)human、ret、mouse
APC標記的兔抗人IgM CHRNA7(Nicotinic-Acetylcholine receptor alpha 7)
Alexa Fluor 350標記的兔抗人IgM Nanog fragment
Alexa Fluor 488標記的兔抗人IgM Natrexone/BSA:Natrexone/KLH
Alexa Fluor 555標記的兔抗人IgM NAP1 (nucleosome assembly protein 1)
Alexa Fluor 647標記的兔抗人IgM N-cadherin
FITC標記的兔抗人分泌型IgA E-cadherin
羅丹明標記的兔抗人分泌型IgA Nephrin Protein
Alexa Fluor 647標記的兔抗人分泌型IgA Neurocan
APC標記的兔抗人分泌型IgA NF2/merlin(neurofibromatosis type 2)
Alexa Fluor 350標記的兔抗人分泌型IgA NFATc1
Alexa Fluor 488標記的兔抗人分泌型IgA phospho-NFKB p65 (pSer536) peptide
Cy5標記的兔抗人分泌型IgA NF-KapBp50(p50 NF-kappa B;p50NFKB)
Cy5.5標記的兔抗人分泌型IgA NGN3(neurogenin 3; Neurog3)
Cy7標記的兔抗人分泌型IgA NGX6 (nasopharyngeal carcinoma/NPC associated gene 6)
PE標記的兔抗人分泌型IgA NIT2 (nitrilase family, member 2)
膠體金標記的兔抗人分泌型IgA NKA(Neurokinin A)
APC標記的兔抗小鼠IgG-Fc NKG2A/CD159a/KLRC1
Alexa Fluor 350標記的兔抗小鼠IgG-Fc NKG2D(natural killer cell group 2D)
Alexa Fluor 488標記的兔抗小鼠IgG-Fc Nm23(NDP Kinase A,NDPKA)
PR3-ANCA(Human proteinase-antineutrophil cytoplasmic antibody) ELISA Kit  人蛋白酶3特異性抗中性粒細胞胞質抗體   48T
Beta-LPH(Human Beta-lipotropic hormone) ELISA Kit  人β-促脂素   48T
LTA(Human lipoteichoic acids) ELISA Kit  人脂磷壁酸   48T
AD(Human amiodarone) ELISA Kit  人乙胺碘呋酮   48T
SA(Human Sialic acid) ELISA Kit  人唾液酸   48T
SM(Human sphingomyelin) ELISA Kit  人鞘磷脂   48T
UFC(Human urinary free cortisol) ELISA Kit  人尿游離*   48T
ASCA(Human Anti-Saccharomyces cerevisiae antibody) ELISA Kit  人抗釀酒酵母抗體   48T
VLA4(Human very late appearing antigen 4) ELISA Kit  人遲現抗原4   48T
AO(Human Acrine Orange) ELISA Kit  人吖啶橙   48T
MTX(Human methotrexate) ELISA Kit  人甲胺喋呤   48T
PABA(Human para-aminobenzoic acid) ELISA Kit  人對氨基苯甲酸   48T
LPA(Human L-phenylalanine) ELISA Kit  人苯*   48T
Irna(Human Immune RNA) ELISA Kit  人免疫核糖核酸   48T
Beta-Nph(Human Beta-naphthol) ELISA Kit  人β萘酚   48T
BLI(Human Beta-Lactamase inhibitors) ELISA Kit  人β內酰胺酶抑制劑   48T
Gal(Human Alpha-galactoyl) ELISA Kit  人α半乳糖基抗體   48T
AlphaNAG (Human AlphaN-acetylglucosaminidase) ELISA Kit  人αN已酰氨基葡糖苷酶   48T
Alpha2-PI (Human Alpha2-plasmin inhititor) ELISA Kit  人α2纖溶酶抑制物   48T