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蛋白免疫印跡(Western Blot)是將組織或細胞總蛋白質經電泳分離后轉移到NC膜或PVDF膜上,然后利用特異性抗體檢測某特定抗原的一種蛋白檢測技術,已廣泛應用于蛋白表達檢測、抗體活性檢測及疾病早期診斷等多個領域。
樣本準備要求:
組織樣本:組織1cm×1cm×1cm大小,冰上取材,用生理鹽水洗凈去除血zhi和污物,并剔除非研究所需的組織,放入已標記的凍存管中,液氮速凍后,轉運至-80℃冰箱保存,干冰運輸。
細胞樣本:培養好的細胞用細胞刮刮下或yi酶消化,離心收集細胞團,細胞團要求1×107 如米粒或黃豆大小,液氮速凍后放入-80 ℃冰箱中保存,干冰運輸。
全血樣本:肝素Na(綠頭)或EDTA(紫頭)抗凝管采集全血1ml,上下顛倒幾次使血液與抗凝劑充分混勻,1h之內進行白細胞提取,細胞團要求 1×107 如米粒或黃豆大小,液氮速凍后放入-80 ℃冰箱中保存,干冰運輸。
蛋白提取液:總蛋白濃度(細胞不低于3μg/μl,組織不低于5μg/μl)。
注意:提取后的蛋白建議經過濃度測定,再進行變性,變性時先加入Sample buffer,再95℃ 水浴10min,緩慢恢復至室溫后離心。變性的蛋白可直接超低溫保存(-80℃冰箱保存或干冰運輸)。
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