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目的與原理轉化是指以質粒dna或以它為載體構建的重組子導入細菌的過程。轉化技術在基因工程領域中占有極重要的地位。目前用得較多的轉化技術為將人工構建的重組質粒到如受體細胞，使重組質粒在受體細胞中穩定地復...
體外通過基因工程手段所構建的含目的基因的重組質粒,選用轉化和篩選技術,可獲得含重組的陽性克隆.在此陽性克隆中,DNA可在生物體系中大量擴增,繁殖,保存以及表達目的基因的產物,這是PCR體外擴增DNA所...
外源DNA片段和線狀質粒載體的連接，也就是在雙鏈DNA5'磷酸和相鄰的3'羥基之間形成的新的共價鏈。如質粒載體的兩條鏈都帶5'磷酸，可生成4個新的磷酸二酯鏈。但如果質粒DNA已去磷酸化，則吸能形成2個...
在自然條件下,很多質粒都可通過細菌接合作用轉移到新的宿主內,但在人工構建的質粒載體中,一般缺乏此種轉移所必需的mob基因,因此不能自行完成從一個細胞到另一個細胞的接合轉移。如需將質粒載體轉移進受體細菌...
一、原理回收目的片段的方法很多，常用的有凍融法，低熔點瓊脂糖法，透析代法、電泳回收法、玻璃孔回收法等。本實驗采用電泳回收法。通過特別的V形電泳槽，將挖出的含有目的片段的凝膠置于V形槽前，接通電泳電源，...
1998年，AndrewFire和CraigMello提出了一項新技術：通過dsRNA誘導特異基因的沉默，即所謂RNAi。2000年，AmyPasquinelli等將lin-4和let-7作小時序RN...
由于在一些生物中RNAi的影響格外顯著，有人提出在RNAi途徑中可能存在某個(信號)擴增的步驟。這種擴增可能是復制外源注入的dsRNA從而產生更多的sirna，也可能是直接擴增siRNA本身。這種擴增...
1868年，瑞士的內科醫生FriedrichMiescher從外科醫院包扎傷口的繃帶上的膿細胞核中提取到一種富含磷元素的酸性化合物，將其稱為核質(nuclein);后來他又從鯖魚精中分離出類似的物質，...
1.外源基因在原核細胞中的表達蛋白質通常是研究的zui終目標，因此蛋白質的表達在基因工程中占有非常重要的地位。常用的表達系統有原核細胞和真核細胞。原核細胞表達系統主要使用大腸桿菌，真核細胞表達系統主要...
隨著分子生物學研究發展的不斷廣泛和深入，PCR已成為一門相當成熟的常規技術，而熱聚合酶（即Taq酶）的合理選擇是PCR成敗與否的一個關鍵因素。目前市面上有多種Taq酶，能夠滿足多方面的實驗需要。那么，...
ThisprotocolyieldsplasmidDNAthatissuitableforrestrictiondigestsａndcloningpurposes.Thispreparationmet...
堿裂解法提取質粒利用的是共價閉合環狀質粒DNA與線狀的染色體DNA片段在拓撲學上的差異來分離它們。在pH值介于12.0-12.5這個狹窄的范圍內，線狀的DNA雙螺旋結構解開變性，在這樣的條件下，共價閉...
隨著對基因認識的不斷深入，發現在同種生物的不同個體之間，盡管其蛋白質產物的結構和功能*相同或僅存在著細微的差異，但在DNA水平卻存在著差異，尤其在不編碼蛋白質的區域以及沒有重要調節功能的區域表現更為突...
一．外源RNA誘導RNAi的應用1.基因功能研究從2001年《Nature》雜志上報道在哺乳動物培養細胞中通過siRNA成功誘導了特異性靶基因表達沉默后，RNA干擾技術就作為一項特異性基因沉默的有效工...
定量pcr實驗簡明操作2xtaqManUniversalPCRMasterMix20xTaqManGeneexpressionKits1.模板、引物及探針用量DNA用量：10~100ng每反應；cDN...
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